Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats:

Presentatie over: "Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats:"— Transcript van de presentatie:

1 Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats: Howest Brugge Stagementor: Anneleen Cottyn

2 Inhoudstafel Inleiding Ontstaan van kanker Ontstaan en voorkomen colorectale kanker Risicostoffen Beschermende stoffen Probleemstelling Methoden Maagdarmsimulatie Cytotoxiciteitstesten Resultaten MTS en NR Resultaten immunofluorescentie Resultaten FACS Besluit Toekomst

3 Ontstaan van kanker DNA-schade Inleiding

4 Ontstaan en voorkomen colorectale kanker Colon en rectum 3 e meest voorkomend Geen duidelijke oorzaken Erfelijk Risicofactoren Obesitas + te weinig beweging Chronische inflammatie Te lange gastro- intestinale transsittijd Risicostoffen in voeding Risicofactoren Inleiding

5 Risicostoffen Zout Nitraat/nitriet Lichaam: nitriet  nitraat  ureum Indien niet  nitriet bindt aan hemoglobine  zuurstoftekort  Ontstaan carcinogene nitrosoverbindingen Heemijzer Bevordert vorming carcinogene nitrosoverbindingen Teveel aan ijzer  vrije radicalen + ontstekingsfactoren activeren in darm Vet, suiker,… Inleiding

6 Beschermende stoffen Groenten en fruit Indirect effect: vitamines, mineralen, antioxidanten & voedingsvezels verkleinen kans op overgewicht Voedingsvezels o niet verteerbaar; gefermenteerd door bacteriën Calcium o Verminderde proliferatie o Normale differentiatie o Bindt aan galzuren- en vrije vetzuren Antioxidanten Neutraliseren vrije radicalen Vitamines, … Inleiding

7 Probleemstelling Rapport WCRF uit 2007: consumeren van rood en verwerkt vlees verhoogt risico op ontstaan colorectale kanker.  nog geen wetenschappelijke bewijzen  oorzaken?

8 Maagdarmsimulatie Methoden

9 Cytotoxiciteitstesten o CaCO 2 : 96-well plaat Methoden cytotoxiciteitMTS Tetrazolium (geel)  formazan (bruin) NR Opname door levende cellen Necrose/ apoptose IF Apoptose (groen) & necrose (rood ) FACS Lichtverstrooiing & emissielicht

10 MTS en NR Vlees Overleving vlees > overleving controlesap Resultaten

11 MTS en NR Additieven: Overleving vlees > overleving zout Methoden

12 MTS en NR Overleving vlees > overleving zout + nitriet Resultaten

13 Immunofluorescentie Staal colon 3 uur; verdunning 1/8; 2% zout Resultaten

14 FACS Enkel kleuring met Annexine-V-FLUOS = enkel aanduiding apoptose Veel negatief Resultaten

15 Besluit Vivaspin beste voorbehandelingsmethode MTS beter dan NR Overleving vlees > overleving controlesap  sap nog te toxisch? Zout en zout + nitriet minder goede overleving dan vlees FACS en IF: preliminaire experimenten

16 Toekomst MTS beter dan NR  enkel met MTS werken Andere voedingsmiddelen onderzoeken Invloed darmbacteriën? Resultaten representatief in vivo ?

17 Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats: Howest Brugge Stagementor: Anneleen Cottyn