Door Joeri Vandekerckhove Evaluatie van chromogene media voor de detectie van groep B streptokokken bij zwangeren Door Joeri Vandekerckhove o.l.v. Dr. W. Vandewal

Profiel: Streptococcus agalactiae: Gram-positieve kok Grijswitte kolonies op bloedagar Oxydase en katalase negatief β-hemolytisch (of niet hemolytisch!) CAMP-positief … Over wie zullen we het tijdens mijn voorstelling hebben?  GBS. --- Op de niet-hemolytische GBS kom ik later terug.

Uitzicht gramgekleurde streptokok Gramkleuring 1‘ kristalviolet – spoelen 1’ lugol – spoelen Spoelen met ethanol – spoelen 30” zure fuchine – spoelen

Situering: Streptococcus agalactiae: commensaal op slijmvliezen van rectum, vagina…enz. 20 – 30 % gekoloniseerd veroorzaakt sepsis en meningitis GBS worden gekoloniseerd in de vagina vanuit het rectum veronderstelt men. Bij de ene aanstaande moeder zijn de kiemen dus wel aanwezig, bij den andere dan weer niet. In de literatuur vindt men dat 20-30% van de vrouwen gekoloniseerd is met GBS. --- veroorzaakt ernstige ziekten.

Behandeling? Baby nog niet geboren  intrapartaal penicilline G Baby is geboren  ampicilline en aminoglycoside Nog in experimentele fase: vaginale douche op basis van chloorhexidine Verborgen dia: indien de screening positief is, kan men afhankelijk van het stadium waarin de zwangerschap zich bevind een geneesmiddel toedienen. Het meest efficiënt is als men 4u voor de bevalling start met de AB-kuur.

Werking? penicilline G en ampicilline: blokkering enzym betrokken bij opbouw celwand. Aminoglycoside: remming eiwitsynthese bacterie Chloorhexidine: aantasting van de celmembraan bacterie

Preventie: 1. Op basis van risicofactoren: Vroeggeboorte Koorts tijdens bevalling (+38° C) Vliezen reeds +18h gebroken … 2 soorten aanpakken om infectie van de baby te voorkomen en om te beslissen als er –indien de GBS dan toch aanwezig zijn- een AB moet worden toegediend. Men kan controleren als er bepaalde risicofactoren aanwezig zijn. Hiermee weet je niet zeker als er al dan niet GBS aanwezig zijn. Deze methode dient eigenlijk enkel om het besmettingsrisico sterk te reduceren.

Preventie: 2. Screening naar GBS: GBS-gevoelig medium: Door specifiek chromogeen substraat ↓ GBS heeft specifieke kleur op bodem De tweede methode is de screeningsmethode. Het is trouwens ook deze methode die wordt gebruikt in het ziekenhuis waar ik mijn stage heb uitgevoerd. Om kort het principe te bespreken kan ik u vertellen dat er in de bodem bepaalde chromogene substraten zitten die enkel door GBS kunnen worden gemetaboliseerd. Hierdoor ontstaan vervolgens specifiek gekleurde kolonies die de GBS aanduiden.

Samenstelling: Ingrediënt Hoeveelheid (in g) Agar 15 Peptonen en groeifactoren 33 Contraststoffen 3 Chromogene substraten 0,4 Antibiotica en antifungale stoffen 0,04 Voor elke fabrikant verschillend

Vergelijken van de 3 bodems: Granada StreptoB ID StrepB Select Op de Granadabodem van Biomedics krijgen de GBS een oranje kleur. Op de Strepto B ID bodem van BM een rode of roze kleur en op de StrepB Select bodem van BR een turkoois blauwe kleur. De reden waarom ik deze bodems heb vergeleken met elkaar is dat de Granada bodem een deel van de GBS mist in de screening, namelijk de niet-hemolytische GBS, want deze worden niet gedetecteerd op deze bodem. Op de twee nieuwe commerciële bodems worden deze wel gedetecteerd. Deze bodems worden tevens zowel rechtstreeks als na aanrijking geënt. Biomedics bioMérieux Bio-Rad

Uitvoering: De vaginale wisser (en rectale wisser) wordt in een F.O.-oplossing gezet. Ten eerste omdat de kiemen dan beter uit de droge wisser kunnen gehaald worden. Ten tweede omdat de kiemen dan evenredig kunnen worden verdeeld over de drie te testen bodems. De resterende vloeistof (2*0.3mL) wordt dan verdeeld over de 2 aanrijkingsbuizen. Alles wordt overnacht en aeroob geïncubeerd bij 37°C. De aanrijkingsbuizen worden op dag twee geënt op de onderste helft van de bodem.

Staalname: Enkel vaginale wisser Droge wisser  Kleinere opbrengst Vaginale en rectale wisser Natte wisser  Grootste opbrengst

CAMP-test Bevestiging: dag 1 = positieve groei + dag 2 = positieve groei (rechtstreeks) (aangerijkt) CAMP-test Een positief resultaat op een bodem dient te worden bevestigd met een CAMP-test. Een streepenting van Staphylococcus Aureus wordt loodrecht geënt op enkele millimeter van een streepenting van de vermoedelijke Streptococcus agalactiae. Indien er een versterkte hemolysezone is, kan men zeggen dat het een Streptococcus agalactiae is. MAAR! Tijdens de testings hebben we ontdekt dat er ook agalactiae zijn die CAMP-negatief zijn. Bijgevolg… (zie volgende dia).

Bevestiging: Indien CAMP-test negatief  latex-agglutinatie. Bijgevolg wordt er nog een latex agglutinatie uitgevoerd indien de CAMP-test negatief is om zeker te zijn dat het geen CAMP-negatieve GBS is. Indien CAMP-test negatief  latex-agglutinatie.

Resultaten: Aantal stalen: 174 Aantal positief: 45 Granada StreptoB ID Na aanrijking StrepB Select Echt positieven 37 30 39 36 45 Echt negatieven 129 125 128 119 114 Vals positieven 4 1 10 15 Vals negatieven 8 6 9 Granada mist 8 van de 45 stalen, BM na aanrijking 6 van de 45 stalen en BR na aanrijking 0 van de 45 stalen. Verder bespreken van de resultaten…

Resultaten: Aantal stalen: 174 Aantal positief: 45 Granada StreptoB ID Na aanrijking StrepB Select Sensiviteit 82,2 % 66,7 % 86,7 % 80,0 % 100 % Specificiteit 96,9 % 99,2 % 92,2 % 88,4 % Door veel vals positieve resultaten heeft de StrepB Select na aanrijking een relatief lage specificiteit. Ze heeft dan wel een sensiviteit van 100%, d.w.z. dat ze alle GBS heeft gedetecteerd. De Granadabodem heeft dan een specificiteit van 100% wat betekent dat alle kiemen die een oranje kleur hadden op de bodem wel degelijk GBS waren, maar… enkele (onder andere niet-hemlolytische GBS) glipten door de mazen van het net waardoor de sensiviteit dan terug aan de lage kant is. De bodem van BM scoort tussen beide bodem is, maar geeft niet zo’n goede indruk met een zeer lage sensiviteit. Eén opmerking: Granada  geen aanrijking

X2 Resultaten: Tussen 01/01/02 en 31/12/07 Totaal aantal: 5196 stalen Aantal positief: 651 stalen % positief: 12.53% (bron: statistiek AZ St-Lucas) Als we het aantal positieve screeningen van de afgelopen 5 jaar vergelijken met de het aantal positieve screeningen uit het onderzoek stellen we vast dat we ongeveer een dubbel aantal hebben gevonden. X2 Tijdens vergelijking bodems Totaal aantal: 174 stalen Aantal positief: 45 stalen % positief: 25.90%

Het labo schakelt over van Granadabodem  StrepB Select Besluit: De StrepB Select bodem na aanrijking is veel gevoeliger dan de andere twee methodes. Het labo schakelt over van Granadabodem  StrepB Select

Vragen?? Bedankt voor uw aandacht.