Meetonzekerheidstesten van diverse microbiologische parameters voor voedingsstalen Validatie van Rapid Pseudomonas aeruginosa agar en Pseudomonas CN agar voor waterstalen JASPER OSSTYN EUROFINS FOOD TESTING BELGIUM

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Inleiding Eurofins Food Testing Belgium  Afdeling: microbiologie Laboratorium ‘Voeding’ Laboratorium ‘Water’

Deel 1 MEETONZEKERHEIDSTESTEN VAN DIVERSE MICROBIOLOGISCHE PARAMETERS VOOR VOEDINGSSTALEN

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Inleiding Meetonzekerheid: validatieparameter Onderdeel van validatiedossier + doorgeven in verloop van tijd aan FAVV 30 kwantitatieve methoden worden getest Binnen 4 matrixcategorieën:  Doel: 10 stalen testen per matrixcategorie per methode MatrixcategorieBeschrijvingVoorbeelden 1Vloeistoffen en poedersmelk, kruiden,… 2Gemengde vaste stoffenpuree, gehakt, worst,… 3(Zeer) kleine vaste stoffensalades, kroketten, pralines,… 4Overige vaste stoffenrauw vlees, wortelen, aardappelen,…

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Strategie

Meetonzekerheidstesten van diverse microbiologische methoden van voedingsstalen

Black box parameters: - De bemonstering - Het laboratoriummonster - De subbemonstering en de aanmaak van de moedersuspensie - De matrix - De gebruikte apparatuur - De gebruikte voedingsmedia en reagentia - De analist - Het tijdstip van uitvoeren - Toevallige fouten - De variabiliteit van de methode (bias)

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Resultaten pathogenen Het doel per 10 stalen per matrixcategorie behaald (Ja of nee) Categorie: 1 (vloeistoffen & poeders) 2 (gemixte vaste stoffen) 3 (kleine vaste stoffen) 4 (overige vaste stoffen) Bacillus cereusNeeJa Nee Clostridium perfringensNee Coagulase positieve stafylokokkenJa NeeJa Listeria monocytogenesNee

Resultaten hygiëne-indicatoren Het doel per 10 stalen per matrixcategorie (Ja of nee) Categorie: 1 (vloeistoffen & poeders) 2 (gemixte vaste stoffen) 3 (kleine vaste stoffen) 4 (overige vaste stoffen) Totaal aeroob kiemgetal (4 methoden)NeeJa Psychrofiele micro-organismen (2 methoden)Nee JaNee Totaal anaeroob kiemgetal (2 methoden)JaNee Enterobacteriaceae (2 methoden)NeeJa Nee Coliformen (3 methoden)Nee Escherichia coliNeeJa

Resultaten bederfindicatoren Het doel per 10 stalen per matrixcategorie (Ja of nee) Categorie: 1 (vloeistoffen & poeders) 2 (gemixte vaste stoffen) 3 (kleine vaste stoffen) 4 (overige vaste stoffen) Gisten (4 methoden)NeeJa Nee Schimmels (4 methoden)JaNeeJaNee Melkzuurbacteriën (2 methoden)NeeJa Pseudomonas spp.Nee Ja Sulfietreducerende anaerobenNee

Meetonzekerheidstesten van diverse microbiologische methoden van voedingsstalen ParameterU cat. 1 (In log kve/g)U cat. 2 (In log kve/g)U cat. 3 (In log kve/g)U cat. 4 (In log kve/g) Gisten (DRBC) Aantal stalen beschikbaar: 0,70 7 stalen 0,97 13 stalen 1,19 20 stalen 1,05 7 stalen Gisten (YGC) Aantal stalen beschikbaar: 0,94 7 stalen 0,83 11 stalen 0,73 19 stalen 0,91 9 stalen Gisten (petrifilm) Aantal stalen beschikbaar: 0,82 11 stalen 0,61 11 stalen 0,27 18 stalen 0,38 12 stalen Osmofiele gisten (DG18) Aantal stalen beschikbaar: 0;88 6 stalen 0,78 12 stalen 0,90 21 stalen 1,21 7 stalen Totaal aeroob mesofiel kiemgetal (plaatgiet) Aantal stalen beschikbaar: 1,01 10 stalen 0,73 17 stalen 0,58 15 stalen 0,58 14 stalen Totaal aeroob mesofiel kiemgetal (spiraalenter) Aantal stalen beschikbaar: 0,53 10 stalen 0,79 17 stalen 0,52 15 stalen 0,52 14 stalen Enterobacteriaceae (klassiek) Aantal stalen beschikbaar: 0,59 8 stalen 0,94 15 stalen 0,56 15 stalen 0,78 9 stalen Enterobacteriaceae (petrifilm) Aantal stalen beschikbaar: 0,67 8 stalen 0,40 13 stalen 0,68 15 stalen 0,70 10 stalen

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie

Conclusie Voor de meeste methoden werd het doel niet behaald. Voor veel voorkomende methoden werd het doel wel grotendeels gehaald. Toekomstperspectief: ◦Goede basis ◦Verder werken op deze testen

Deel 2 VALIDATIE VAN RAPID PSEUDOMONAS AERUGINOSA AGAR EN PSEUDOMONAS CN AGAR VOOR WATERSTALEN

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Inleiding Kwantitatieve bepaling van Pseudomonas aeruginosa Membraanfiltratie  Doel: is RPSA agar een mogelijk alternatief voor PCN agar? KenmerkPCN agarRPSA agar Incubatieperiode44±4 uur (controle op overgroei na 22±2 uur) 22±2 uur Bevestiging nodigJaNee Motiliteit van Pseudomonas aeruginosa Hoge motiliteitLagere motiliteit

Inleiding

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Validatie 1 Validatie 1: Matrices: drinkwater (DW), grondwater (GW) en oppervlaktewater (OW) Spike: kve/l Voor PCN agar: herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid en meetonzekerheid Voor RPSA agar: herhaalbaarheid

Resultaten validatie 1 Over het algemeen: veel variatie wegens lage spike. ◦Slechts gemiddeld 5-6 kolonies per plaat teruggevonden. Parameter DrinkwaterGrondwaterOppervlaktewater Herhaalbaarheid PCN agar Relatieve standaardafwijking↓↑↑ Herhaalbaarheidslimiet↓↑↑ Evaluatie t.o.v. het 95% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval Herhaalbaarheid RPSA agar RSTD herh ↑↑ Herhaalbaarheidslimiet↑↑ Evaluatie t.o.v. 95% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval Één waarde buiten het interval Alle waarden binnen het interval Reproduceerbaarheid PCN agar Relatieve standaardafwijking↑↑ Reproduceerbaarheidslimiet↑↑ Evaluatie t.o.v. het 95% betrouwbaarheidsinterval Één waarde buiten het intervalAlle waarden binnen het interval Twee waarden buiten het interval Evaluatie t.o.v. het 99% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval Meetonzekerheid PCN agarMeetonzekerheid (in log kve/100 ml)0,380,590,46

Resultaten validatie 1 Over het algemeen: veel variatie wegens lage spike. ◦Slechts gemiddeld 5-6 kolonies per plaat teruggevonden. Parameter DrinkwaterGrondwaterOppervlaktewater Herhaalbaarheid PCN agar Relatieve standaardafwijking (RSTD herh. )26%67%64% Herhaalbaarheidslimiet0,35 log kve/100 ml0,76 log kve/100 ml0,72 log kve/100 ml Evaluatie t.o.v. het 95% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval (0,24 – 0,73 log kve/100 ml) Alle waarden binnen het interval (-0,13 – 0,94 log kve/100 ml) Alle waarden binnen het interval (-0,11 – 0,91 log kve/100 ml) Herhaalbaarheid RPSA agar RSTD herh 76%44%79% Herhaalbaarheidslimiet0,91 log kve/100 ml0,65 log kve/100 ml0,79 log kve/100 ml Evaluatie t.o.v. 95% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval (-0,21 – 1,06 log kve/100 ml) Één waarde buiten het interval (0,08– 0,99 log kve/100 ml) Alle waarden liggen binnen het interval (-0,20 – 0,91 log kve/100 ml) Reproduceerbaarheid PCN agar Relatieve standaardafwijking (RSTD repr. )45%70%47% Reproduceerbaarheidslimiet0,63 log kve/100 ml0,88 log kve/100 ml0,66 log kve/100 ml Evaluatie t.o.v. het 95% betrouwbaarheidsinterval Één waarde buiten het interval (0,06 – 0,94 log kve/100 ml) Alle waarden binnen het interval (-0,16 – 1,06 log kve/100 ml) Twee waarden buiten het interval (-0,14 – 0,78 log kve/100 ml) Evaluatie t.o.v. het 99% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval (-0,08 – 1,07 log kve/100 ml) Alle waarden binnen het interval (-0,36 – 1,26 log kve/100 ml) Alle waarden binnen het interval (-0,11 – 1,10 log kve/100 ml) Meetonzekerheid PCN agarMeetonzekerheid0,38 log kve/100 ml0,59 log kve/100 ml0,46 log kve/100 ml

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Validatie 2 Validatie 2: Matrices: drinkwater (DW) en flessenwater (FW) Spike: kve/l Voor PCN agar en RPSA agar: herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid en meetonzekerheid

Resultaten validatie 2 Medium PCN agarRPSA agar Matrix DrinkwaterFlessenwaterDrinkwaterFlessenwater Herhaalbaarheid Relatieve standaardafwijking↓↓ Herhaalbaarheidslimiet↓↓ Evaluatie t.o.v. het 95% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval Reproduceerbaar heid Relatieve standaardafwijking↓↓ Reproduceerbaarheidslimiet↓↓ Evaluatie t.o.v. het 95% betrouwbaarheidsinterval Één waarde buiten het interval Alle waarden binnen het interval Evaluatie t.o.v. het 99% betrouwbaarheidsinterval Alle waarden binnen het interval Één waarde buiten het interval Alle waarden binnen het interval Meetonzekerheid Meetonzekerheid (in log kve/100 ml) 0,120,170,260,18

Inhoud Inleiding Deel 1: meetonzekerheidstesten in voeding ◦Inleiding ◦Strategie ◦Resultaten ◦Conclusie Deel 2: validatie van PCN en RPSA agar in water ◦Inleiding ◦Validatie 1 ◦Validatie 2 ◦Conclusie

Conclusie Validatie 1: ◦Hoge variatie ◦  Verklaring: laag aantal kolonies op platen ◦Waarden vergelijkbaar voor RPSA en PCN agar Validatie 2: ◦Lage variatie ◦Weinig verschil tussen RPSA agar en PCN agar Conclusie: RPSA agar kan een mogelijk alternatief zijn voor PCN agar.

Bedankt voor uw aandacht JASPER OSSTYN EUROFINS FOOD TESTING BELGIUM