Vergelijking van twee commerciële Kleihauer-Betke kleuringen voor bepaling van foetaal bloed Lindsay Vanhuyse Stagementor: Apr. Eline Verhoye Stagebegeleider: Anneleen Cottyn

Inhoudsopgave Belang Kleihauer-Betke kleuring Probleemstelling Praktische uitvoering Resultaten en discussie Besluit 2 van 22

Belang Kleihauer-Betke kleuring Kleihauer-Betke, zure elutie kleuring o Detectie en kwantificatie foetale RBC in de maternele circulatie Belang Rhesus D negatieve zwangere vrouwen Hemolytische ziekte pasgeborene of neonaat 3 van 22

Belang Kleihauer-Betke kleuring RhD immunisatie voorkomen o Toediening profylaxe anti-D(Rh) IgG (=Rhogam) o Volume bepaling foetomaternele transfusie Kleihauer-Betke kleuring Flowcytometrie mRBC fRBC mRBC 4 van 22

Probleemstelling AZ Delta (2015) Stedelijk Ziekenhuis Roeselare (SZR) Heilig Hart Ziekenhuis Roeselare - Menen (HHRM) 5 van 22

Praktische uitvoering Kleihauer-Betke kleuring Guest Medical kit Klinipath kit Flowcytometrie FMH QuikQuant kit (target HbF) Gespikete stalen: mannelijk volbloed EDTA gespiked met bepaalde hoeveelheid pasgeboren EDTA bloed 6 van 22

Resultaten en discussie Pre-analytische aspecten Bepaling maximale tijdslimieten tussen uitstrijken, kleuren en microscopisch evalueren  Na 72 uur staal uitstrijken, dalende trend % fRBC merkbaar 7 van 22

Resultaten en discussie Pre-analytische aspecten Bepaling maximale tijdslimieten tussen uitstrijken, kleuren en microscopisch evalueren  Verlenging tijdspannes tussen uitstrijken en kleuren na 72 u, geen dalende trend % fRBC merkbaar 8 van 22

Resultaten en discussie Pre-analytische aspecten Bepaling maximale tijdslimieten tussen uitstrijken, kleuren en microscopisch evalueren Kleuringstijd variëren – Guest Medical aankleuring mRBC normale kleuring  Roze verkleuring maternele cellen bij verlenging tijdspannes tussen uitstrijken en kleuren (Guest Medical) 9 van 22

Resultaten en discussie Pre-analytische aspecten Bepaling maximale tijdslimieten tussen uitstrijken, kleuren en microscopisch evalueren  Verlenging tijdspannes tussen kleuren en microscopisch evalueren na 72 u, geen dalende trend % fRBC merkbaar 10 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Bepaling aantal RBC in 500X veld SZR: 1000 RBC in 500X veld HHRM: 650 RBC in 500X veld Berekening volume FMT (Mollison) = (aantal fRBC/ totaal aantal RBC) X 1800 ml X 1,22 X 1,09 Theoretisch berekend %fRBC (bv. 0,5%) Stel: 1000 RBC in 500X veld ml fRBC = [86 fRBC / (1000 X 15)] X 1800 ml X 1,22 X 1,09 = 13,72 ml Stel: 650 RBC in 500X veld ml fRBC = [86 fRBC / (650 X 15)] X 1800 ml X 1,22 X 1,09 = 21,11 ml 11 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Bepaling aantal RBC in 500X veld 12 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Vergelijking kleuringskits m.b.v. flowcytometrie Passing-Bablok regressie analyse: Klinipath (M1) 13 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Vergelijking kleuringskits m.b.v. flowcytometrie Passing-Bablok regressie analyse: Guest Medical (M2) 14 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Subjectieve beoordeling microscopisch beeld Guest Medical Klinipath 15 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Subjectieve beoordeling microscopisch beeld Guest Medical Klinipath 16 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Reproduceerbaarheid van uitstrijken en kleuren Klinipath ® kitGuest Medical ® kit CV (%)SDCV (%)SD 0,5 % 7,030,0324,850,13 1,0 % 17,690,1917,460,18 5,0 %3,710,202,220,11 Gemiddelde9,480,1414,840,14 17 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Inter- persoonlijke variabiliteit bij microscopische telling Klinipath ® kitGuest Medical ® kit CV (%)SDCV (%)SD 0,5%17,680,098,340,04 5,0%16,430,7522,471,03 0,65%17,080,0910,010,05 0,0%0,00 0,1%26,150,0317,150,02 gemiddelde 15,470,1911,590,23 18 van 22

Resultaten en discussie Analytische aspecten Optimalisatie aanmaak en bewaring positief QC materiaal BCSH richtlijn: 1 % gespiked staal max 4 dagen bewaren (4°C) SZR: 2 % gespiked staal, 1 week bewaren frigo HHRM: 11 % gespiked staal, telkens vers aanmaken  SZR (CV<15 %), sluit beter aan met BCSH richtlijn positieve QC (HHRM) positieve QC (SZR) CV (%)SDCV (%)SD week 1 19,531,827,590,16 week 2 11,511,5113,310,27 19 van 22

Resultaten en discussie Post-analytische aspecten Kostprijs en arbeidsintensiviteit van beide kits Reagentia kost per jaar: Guest Medical: 710,08 euro Klinipath: 156,39 euro Tijdsduur uitvoering: Guest Medical ® Klinipath ® uitstrijkje laten drogen20 min fixatie3 min5 min drogen/5 min elutie fase30 sec20 sec tegenkleuring2 min3 min kleuring laten drogen20 min 45 min 30 sec53 min 20 sec 20 van 22

Besluit Huidige workflow <48 u (uitstrijken, kleuren en bekijken) Omzetting volume fRBC maternele RBC/ 500X veld Reproduceerbaarheid kleuren en uitstrijken:  0,5 % - 5,0 % : CV 2,22 % - 24,85 % Inter-persoonlijke variatie:  0,0 % - 5,0 %: CV 0,0 % - 26,15 % Positieve QC: SZR methode (2 %) – 1X aanmaken/week Guest MedicalKlinipath Analytisch (%fRBC)goed Microscopisch beeldbeterminder Vals pos. interpretatiehooglaag Reagentia kost / jaar710,08 euro156,39 euro Tijdsduur45 min53 min 21 van 22

Bedankt voor uw aandacht 22 van 22