De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

Immunohistochemische kleuring op Benchmark XT (Ventana) versus Bond-Max (Leica) STUDENT: SIEGLINDE PATTYN STAGEMENTOR: DR. N. DE WEVER STAGEBEGELEIDER:

Verwante presentaties


Presentatie over: "Immunohistochemische kleuring op Benchmark XT (Ventana) versus Bond-Max (Leica) STUDENT: SIEGLINDE PATTYN STAGEMENTOR: DR. N. DE WEVER STAGEBEGELEIDER:"— Transcript van de presentatie:

1 Immunohistochemische kleuring op Benchmark XT (Ventana) versus Bond-Max (Leica) STUDENT: SIEGLINDE PATTYN STAGEMENTOR: DR. N. DE WEVER STAGEBEGELEIDER: MEVR. K. VAN OOSTVELDT STAGEPLAATS: AZ SINT-AUGUSTINUS VEURNE ACADEMIEJAAR HOWEST BRUGGE: MEDISCH LABORATORIUMTECHNOLOGIE 1

2 Inhoudstafel 1.Onderzoeksvraag 2.Toestellen  Benchmark XT (Ventana)  Bond-Max (Leica) 3.Methode  Validatie  Tijdsmetingen 4.Resultaten  Tijden  Kleuringen 5.Besluit 2

3 1. Onderzoeksvraag  Hoeveel tijd vragen beide toestellen van de laborant? 3 Benchmark XT (Ventana) Bond-Max (Leica)

4 2. Toestel: Benchmark XT (Ventana) 4 Glaasjescaroussel Liquid coverslip

5 2. Toestel: Bond-Max (Leica) 5 Covertile Antilichaam volume 100µl of 150µl

6 3. Methode  Validatie 11 antilichamen Positief controlemateriaal Start: Protocol aangewezen door firma Leica Aanpassen: o Geconcentreerd antilichaam  Verdunning  Incubatietijd  Buffer o Ready-to-use antilichaam  Incubatietijd  Buffer o Antilichaam andere firma  Tijd meten van elke uitgevoerde stap voor beide toestellen Klinische stalen (zelfde voor beide toestellen) Drie runs 6

7 4. Resultaat: Werktijd van de laborant 7

8 4. Resultaat: Runtijd 8

9 4. Resultaten: Totale tijd 9

10 4. Resultaat: Kleuringen 10 KleuringPlaatsBenchmark XT (Ventana)Bond-Max (Leica)Opmerking Anti-P16Kern & Cytoplasma Achtergrondkleuring, aanpassing antigenretrieval Anti-Ki-67KernOptimaal

11 4. Resultaat: Kleuringen KleuringPlaatsBenchmark XT (Ventana)Bond-Max (Leica)Opmerking Anti-CDX2KernOptimaal 11

12 4. Resultaat: Kleuringen 12 KleuringPlaatsOpmerking Anti-P504SCytoplasmaVerdere validatie noodzakelijk Anti-34βe12CytoplasmaAchtergrondkleuring, aanpassing antigenretrieval Anti-P53KernAchtergrondkleuring, aanpassing antigenretrieval Anti-HPSpiraalvormige bacterieControleweefsel te hoog gelegen, werd niet gekleurd. Sommige resultaten worden hierdoor verworpen. Kleuring wel goed.

13 5. Besluit  Onderzoeksvraag: Hoeveel tijd vragen beide toestellen van de laborant? Werktijd: Benchmark XT > Bond-Max Runtijd: Benchmark XT > Bond-Max Totale tijd: Benchmark XT > Bond-Max  Indien een optimale validatie voorafgaat aan het klinisch gebruik, kan de tijd nodig van de laborant gereduceerd worden met het gebruik van Bond-Max (Leica). 13

14 Bedankt voor uw aandacht! 14 Benchmark XT (Ventana) Bond-Max (Leica)

15 Immunohistochemie: Principe  Antigen Eiwit op oppervlak cel of intracellulair Aan- of afwezigheid wijst op ziekte  Antilichaam of immunoglobulinen Eiwit door organisme geproduceerd als reactie op antigen Monoklonaal = affiniteit voor slechts één type epitoop van antigen Polyklonaal = affiniteit voor meerdere epitopen van antigen 15

16 IHC: Maken van Polyklonale antilichamen  Polyklonaal =Antiserum met een variëteit aan immuunglobulines die kunnen binden op hetzelfde antigen met verschillende specifieke antistoffen die elk binden op één specifieke epitoop.  Productie Dier inspuiten met antigen Stimulatie immuunrespons  productie antilichamen tegen antigen Antilichamen isoleren uit serum. 16

17 IHC: Maken van Monoklonale antilichamen  Hybridoomtechnologie Immunisatie = Inspuiten antigen in proefdier Isolatie plasmacellen uit milt o Plasmacel produceert antilichamen Onsterfelijk maken van plasmacel o Celfusie met myelomacel  Delen ongeremd o In polyethyleenglycol Selecteren in HAT-medium o Hypoxanthine en Thymidine  Bouwstenen DNA en RNA o Aminopterine  Inhibitie normale syntheseweg DNA en RNA voor myelomacellen o Niet-gefusioneerde plasmacellen sterven van ouderdom o Resultaat = Hybridoma’s Produceren o Verdunning  één cel per putje + groeimedium o Selectie van klonen die gewenste antilichaam produceren 17

18 Immunohistochemie: Principe  Detectiemethoden Directe methode Indirecte methoden o Polymeermethode o Multimeermethode 18

19 Antigenretrieval  Fixatie Stilleggen chemische processen Formaldehyde o Crosslinks met macromoleculen: Aminozuren en eiwitten o Nadeel: Verlies van immunologische herkenning  Proteïnen binden met elkaar  structuurverandering  Antigenretrieval HIER = Heat induced epitope retrieval EIER = Enzyme induced epitope retrieval 19

20 Validatie  Punchen = maken van positief controleweefsel  Geconcentreerd antilichaam Bepalen optimale antilichaamtiter en antigenretrieval Testen met optimale verdunning (ev. Verdunningsreeks)  Bepalen optimale titer Testen van verschillende antigenretrieval technieken  Bepalen optimale antigenretrieval Testen van reeks van positief/negatief weefsel tot adequate specificiteit en sensitiviteit is bekomen  Ready-to-use antilichaam Zie stap 3 & 4 vorige  Kleuringen in duplo uitvoeren op beide toestellen  Vergelijken  Dagelijkse controle Intern positief controleweefsel 20

21 Resultaat: Kleuringen validatie 21 Melan-A (20x)Ki-67 (10x) HP (40x)

22 Anti-P16 Link Roche 22


Download ppt "Immunohistochemische kleuring op Benchmark XT (Ventana) versus Bond-Max (Leica) STUDENT: SIEGLINDE PATTYN STAGEMENTOR: DR. N. DE WEVER STAGEBEGELEIDER:"

Verwante presentaties


Ads door Google