Minimal Residual Disease bepaling bij CLL Waarom zou je het doen? Hoe zou het kunnen?

Overleving na Eerstelijn behandeling met chemotherapie met / zonder rituximab (anti-CD20) maanden

Overleving na donor (allogene) stamceltransplantatie

Waarom werkt allogene stamceltransplantatie ? Donor T-cel anti-CLL effect Treedt vaak op na verminderen afweeronderdukkende medicatie bij optreden graft-versus-host ziekte na donor lymfocyt infusie (DLI)

. Gribben J G et al. Blood 2005;106:4389-4396 ©2005 by American Society of Hematology

A prospective multi-center phase II study HOVON 88 CLL Allogeneic stem cell transplantation after reduced intensity conditioning for high-risk relapsed or refractory CLL. A prospective multi-center phase II study

drie reeksen vergeleken met kappa/lambda/CD19/CD5 MRD bij CLL drie reeksen vergeleken met kappa/lambda/CD19/CD5 Rawstron, Leukemia 2007

werkwijze validatie 7 patiënten casus negen antistof combinaties nieuwe CLL MRD zonder CLL negen antistof combinaties verstuurd naar 10 labs in 9 verschillende landen

uitkomsten laagste inter-lab variatie en minste vals-positieve uitslagen met: CD20 / CD38 / CD19 / CD5 CD22 / CD81 / CD19 / CD5 CD43 / CD79b / CD19 / CD5

waarom niet CD23 ? normale CD5 positieve B cellen zijn ook CD23 positief CD23 komt ook voor op subpopulaties van CD5 negatieve normale B cellen

MRD bij CLL CD20, CD38, CD19 en CD5

CD20 en CD38 expressie CD20 CD38 rijpere B precursors rijpe B cellen geactiveerde T cellen geactiveerde B cellen allerlei precursors plasmacellen NK cellen

waarom CD20 en CD38 bij MRD ? CD19 gated B precursors normale rijpe B cellen CLL

volstaat deze reeks ? ofwel, onderscheidt CD20 en CD38 expressie CLL cellen altijd van normale rijpe en precursor B cellen ?

CD20 soms op (rijpere) B cel precursors = B cel precurors

CD38 soms hoog bij CLL CD19 gated geactiveerde CLL R2 B cel precurors

conclusie reeks met CD38 en CD20 volstaat niet in alle gevallen

MRD bij CLL CD22, CD81, CD19 en CD5

expressie van CD81 en CD22 CD81 CD22 T cellen B cellen Monocyten (zwak) CD22 voorloper en rijpe B cellen

B-cel CD81 en CD22 expressie CD19 gated CLL

MRD met CD22 en CD81 R7 = CLL (moderate CD22) R8 = CLL (moderate CD22, dim CD81)

conclusie reeks met CD22 en CD81 levert in vrijwel alle gevallen bruikbare MRD informatie

MRD bij CLL CD79b, CD43, CD19 en CD5

expressie van CD79b en CD43 CD79b CD43 precursor B cellen (m.n. cytoplasmatisch) rijpe B cellen CD43 T cellen geactiveerde B cellen plasmacellen monocyten granulocyten macrofagen

MRD met CD79b en CD43 CLL rijp B B cel precursors

Conclusie CD79b/CD5/CD43 zelfs bij lage CD5 expressie onderscheidend van normale B cellen

Conclusie CD79b/CD5/CD43 zelfs bij lage CD5 expressie onderscheidend van normale B cellen buis niet informatief indien er geen duidelijke populatie met CD5 en CD79b is

kunnen normale B cellen (rijp en precursor) CD5 positief zijn ? op geactiveerde B cellen T

kunnen normale B cellen (rijp en precursor) CD5 positief zijn ? op geactiveerde B cellen op precursors ? (5-7% van de CD19+ cellen in kind BM is CD5+)

validatie van deze en andere MRD methodes 141 data files, naar 10 internationale labs alleen normale cellen (n=40) 0.00001-0.01% CLL (n=32) 0.01-0.1% CLL (n=69) Rawstron, Leukemia 2007

validatie 141 data files, naar 10 internationale labs alleen normale cellen (n=40) 0.00001-0.01% CLL (n=32) 0.01-0.1% CLL (n=69) inter-operator variabiliteit en fout-positieve metingen ‘t minst bij: CD79b / CD43 CD81 / CD22 CD38 / CD20 Rawstron, Leukemia 2007

analyse-SOP verhoogt precisie en verlaagt fout-positieve uitslag Rawstron, Leukemia 2007

flow MRD correleert met Q-PCR boven 0.01% Rawstron, Leukemia 2007

detectie limiet minimaal 0.01% MRD detecteren die 0.01% moeten minimaal 50 events zijn hoe? minimaal 500.000 leukocyten meten SOP gebruiken Rawstron, Leukemia 2007

Dank voor de aandacht ! CLL or no CLL ?