De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161.

Verwante presentaties


Presentatie over: "Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161."— Transcript van de presentatie:

1 Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161

2 AZ Delta 3 ziekenhuiscampussen Wilgenstraat Brugsessteenweg Menen Centraal labo: Ardolab Hematologie Labo moleculaire diagnostiek (LMD) 2015-20162

3 Inhoudsopgave Literatuurstudie Methodologie Resultaten Discussie Conclusie 2015-20163

4 Bloedstolling Primaire bloedstolling VWF Secundaire bloedstolling Intrinsiek systeem Extrinsiek systeem Common pathway FII FV 2015-20164

5 Factor II FII wordt FIIa: fibrinogeen  fibrine 2015-20165

6 Primaire bloedstolling Vasoconstrictie (stroming bloed↓) Thrombocyten en collageen binden door VWF Flipflop-reactie thrombocyten 2015-20166

7 Intrinsieke pathway Start bij FXII  bindt bij negatief geladen opp 2015-20167

8 Extrinsieke pathway Weefselfactor 2015-20168

9 Common pathway 2015-20169

10 Factor II mutatie [Prothrombine]↑↑ Stollingssysteem = actiever Opsporen: G20210A 2015-201610 ThrombofilieRelatief verhoogd thrombose-risico FII mutatieHeterozygoot: 5 Homozygoot: 80

11 Factor V Normaal FV gesplitst door APC  Stolling remmen Complex met FX (prothrombine activator) 2015-201611

12 Factor V Leiden Thrombofilie Relatief verhoogd thrombose-risico APC-resistentieHeterozygoot: 5 Homozygoot: 80 2015-201612

13 Aminozuren 2015-201613

14 PCR Matrijs: enkelstrengige templaten na denaturatie dubbele DNA-helix Primers Polymerase Nucleotiden Proces 1.T↑ (94 °C): waterstofbruggen breken  templaat-vorm 2.T↓ om primers te laten binden op templaat 3.T↑ (72°C): optimale T voor polymerasen. 2015-201614

15 Real-time PCR Amplificatie DNA waargenomen tijdens PCR TaqMan probe:  Detectie en kwantificering fluorescerende labels (reporters)  Gemeten voordat PCR plateaufase bereikt 2015-201615

16 LMD: TaqMan probe Assay 2015-201616 Legende Vic Dye Fam Dye Quencher Minor groove binder Polymerase Probe Primer Template Extended primer Forward primer probe Reversed primer DNA Template Probe Reversed primer Forward primer Match Probe Reversed primer 1. Assay Components and DNA Template 2. Denatured Template And Annealing Assay Components 3. Polymerization and Signal Generation

17 DNA Purines: adenine en guanine Pyrimidines cytosine en thymine > N-atomen om H + op te nemen  basisch karakter Fosfaatgroepen (negatieve lading) 2015-201617

18 GeneXpert Real-time PCR Volbloed Cartridge, module en I-core 2015-201618

19 GeneXpert https://www.youtube.com/watch?v=mIsBLmjus6Q 2015-201619

20 GeneXpert: I-core 2015-201620

21 2015-201621

22 Resultaten Juistheid Staaltype Reproduceerbaarheid Houdbaarheid Prijsberekening 2015-201622

23 2015-201623 Juistheid StaalLMDGeneXpertStaalLMDGeneXpert 16 894Normaal 07 538He FV 26 772Normaal 35 598He FV 24 705Normaal 37 208He FV 05 213He FII Vrijwilliger 2He FV 12 835He FII 17 489He FII en He FV Vrijwilliger 1He FII 22 787He FII en He FV 16 840He FV IC-063Ho FV Resultaten: juistheid

24 Resultaten: staaltype 2015-201624 EDTA Citraat

25 Resultaten: reproduceerbaarheid 2015-201625 Reproduceerbaarheid StaalModule A1Module A2Module A3Module A4 16 894Normaal Vrijwilliger 1 (EDTA) Heterozygoot FII Vrijwilliger 1 (citraat) Heterozygoot FII Vrijwilliger 2 (EDTA) Heterozygoot FV Vrijwilliger 2 (citraat) Heterozygoot FV

26 Resultaten: houdbaarheid Houdbaarheid StaalVers (< 24h)Na 3 dagenNa 9 dagenNa 1 maand (6 °C) Vrijwilliger 1 (EDTA) Heterozygoot FII Vrijwilliger 1 (citraat) Heterozygoot FII Vrijwilliger 2 (EDTA) Heterozygoot FV Vrijwilliger 2 (citraat) Heterozygoot FV 2015-201626

27 Resultaten: prijsberekening Prijsberekening ToestelGeneXpertLMD Hands-on-time Verwaarloosbaar Ongeveer 2 uur/15 stalenéz Kostprijs reagentia45 euro12,59 euro Totale prijs45 euro20,13 euro 2015-201627  LMD is het goedkoopste methode

28 Conclusie Eenvoudig Snel Verlengde houdbaarheid EDTA en citraat Juistheid en reproduceerbaarheid 100% Duur  AZ Delta blijft bij de TaqMan probe Assay methode 2015-201628


Download ppt "Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161."

Verwante presentaties


Ads door Google