De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161.

Verwante presentaties


Presentatie over: "Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161."— Transcript van de presentatie:

1 Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn

2 AZ Delta 3 ziekenhuiscampussen Wilgenstraat Brugsessteenweg Menen Centraal labo: Ardolab Hematologie Labo moleculaire diagnostiek (LMD)

3 Inhoudsopgave Literatuurstudie Methodologie Resultaten Discussie Conclusie

4 Bloedstolling Primaire bloedstolling VWF Secundaire bloedstolling Intrinsiek systeem Extrinsiek systeem Common pathway FII FV

5 Factor II FII wordt FIIa: fibrinogeen  fibrine

6 Primaire bloedstolling Vasoconstrictie (stroming bloed↓) Thrombocyten en collageen binden door VWF Flipflop-reactie thrombocyten

7 Intrinsieke pathway Start bij FXII  bindt bij negatief geladen opp

8 Extrinsieke pathway Weefselfactor

9 Common pathway

10 Factor II mutatie [Prothrombine]↑↑ Stollingssysteem = actiever Opsporen: G20210A ThrombofilieRelatief verhoogd thrombose-risico FII mutatieHeterozygoot: 5 Homozygoot: 80

11 Factor V Normaal FV gesplitst door APC  Stolling remmen Complex met FX (prothrombine activator)

12 Factor V Leiden Thrombofilie Relatief verhoogd thrombose-risico APC-resistentieHeterozygoot: 5 Homozygoot:

13 Aminozuren

14 PCR Matrijs: enkelstrengige templaten na denaturatie dubbele DNA-helix Primers Polymerase Nucleotiden Proces 1.T↑ (94 °C): waterstofbruggen breken  templaat-vorm 2.T↓ om primers te laten binden op templaat 3.T↑ (72°C): optimale T voor polymerasen

15 Real-time PCR Amplificatie DNA waargenomen tijdens PCR TaqMan probe:  Detectie en kwantificering fluorescerende labels (reporters)  Gemeten voordat PCR plateaufase bereikt

16 LMD: TaqMan probe Assay Legende Vic Dye Fam Dye Quencher Minor groove binder Polymerase Probe Primer Template Extended primer Forward primer probe Reversed primer DNA Template Probe Reversed primer Forward primer Match Probe Reversed primer 1. Assay Components and DNA Template 2. Denatured Template And Annealing Assay Components 3. Polymerization and Signal Generation

17 DNA Purines: adenine en guanine Pyrimidines cytosine en thymine > N-atomen om H + op te nemen  basisch karakter Fosfaatgroepen (negatieve lading)

18 GeneXpert Real-time PCR Volbloed Cartridge, module en I-core

19 GeneXpert https://www.youtube.com/watch?v=mIsBLmjus6Q

20 GeneXpert: I-core

21

22 Resultaten Juistheid Staaltype Reproduceerbaarheid Houdbaarheid Prijsberekening

23 Juistheid StaalLMDGeneXpertStaalLMDGeneXpert Normaal He FV Normaal He FV Normaal He FV He FII Vrijwilliger 2He FV He FII He FII en He FV Vrijwilliger 1He FII He FII en He FV He FV IC-063Ho FV Resultaten: juistheid

24 Resultaten: staaltype EDTA Citraat

25 Resultaten: reproduceerbaarheid Reproduceerbaarheid StaalModule A1Module A2Module A3Module A Normaal Vrijwilliger 1 (EDTA) Heterozygoot FII Vrijwilliger 1 (citraat) Heterozygoot FII Vrijwilliger 2 (EDTA) Heterozygoot FV Vrijwilliger 2 (citraat) Heterozygoot FV

26 Resultaten: houdbaarheid Houdbaarheid StaalVers (< 24h)Na 3 dagenNa 9 dagenNa 1 maand (6 °C) Vrijwilliger 1 (EDTA) Heterozygoot FII Vrijwilliger 1 (citraat) Heterozygoot FII Vrijwilliger 2 (EDTA) Heterozygoot FV Vrijwilliger 2 (citraat) Heterozygoot FV

27 Resultaten: prijsberekening Prijsberekening ToestelGeneXpertLMD Hands-on-time Verwaarloosbaar Ongeveer 2 uur/15 stalenéz Kostprijs reagentia45 euro12,59 euro Totale prijs45 euro20,13 euro  LMD is het goedkoopste methode

28 Conclusie Eenvoudig Snel Verlengde houdbaarheid EDTA en citraat Juistheid en reproduceerbaarheid 100% Duur  AZ Delta blijft bij de TaqMan probe Assay methode


Download ppt "Validatie Factor II mutatie en Factor V Leiden met GeneXpert Amber Vanhaecke Onder begeleiding van Dr. E. Moreau en A. Cottyn 2015-20161."

Verwante presentaties


Ads door Google