De productie en introductie van de bioluminescerende iep op de markt PYRALITECH De productie en introductie van de bioluminescerende iep op de markt Bedrijfsplan Mees Bartsch Tim Bosman Steffi Broos Joey Koopman 5 april 2016

Inhoud Verantwoording Probleemstelling Telescopic Observations & SWOT-Analyse Materiaal & Methode Personeel & Organisatie Herhaalbaarheid & Risico Discussie Conclusie

Verantwoording Broeikaseffect Openbare verlichting Duurzame energie opwekking Luciferines Bioluminescerende iep (Ulmus Hollandica)

Probleemstelling Hoe reëel is het ondernemen om met behulp van genetische modificatie een iepenboom, die doormiddel van een luciferine-cyclus licht afgeeft, te produceren en op de markt te brengen, om openbare verlichting te vervangen?

Telescopic Observations & SWOT-Analyse STERKTES Marktmonopolie van maanden tot jaren. Het product draagt bij aan duurzaamheid en milieuvriendelijkheid. ZWAKTES Technologie is nog niet beschikbaar, ontwikkeling vereist veelvuldige controles. Bomen zijn geen herafneembaar product. KANSEN Uniek en "hip" product. Het product kan in kader milieuvriendelijkheid en energiebesparing mogelijk wereldwijde aftrek vinden. BEDREIGINGEN Huidig GMO beleid verbiedt verkoop en implementatie van product. Consument reageert mogelijk negatief op introductie van van GMO's. .

Telescopic Observations & SWOT STERKTES Marktmonopolie Duurzaamheid Milieuvriendelijkheid. ZWAKTES Technologie is nog niet beschikbaar, ontwikkeling vereist veelvuldige controles. Bomen zijn geen herafneembaar product.

Telescopic Observations & SWOT KANSEN Uniek en "hip" product. Het product kan in kader milieuvriendelijkheid en energiebesparing mogelijk wereldwijde aftrek vinden. BEDREIGINGEN Huidig GMO beleid verbiedt verkoop en implementatie van product. Consument reageert mogelijk negatief op introductie van van GMO's.

Materiaal & Methode Isolatie LRE uit Photimus pyralis De isolatie en amplificatie van cDNA van het LRE coderende gen uit Photimus pyralis wordt uitgevoerd zoals eerder is gedaan door Keiko Gomi and Naoki Kajiyama. Oligotex-dT30 (Super) (Takara, Kyoto, Japan). RT-PCR oligo(dT)-M13-M4 primer

Materiaal & Methode Cloning vektor Full-length LRE cDNA (927bp) & en pGreenII 0229 62-SK vector digestie met EcoRI. 1% agarosegel controle voor digestie en ligatie. Co-transformatie pGreenII 0049 en pGreenII 0229 62-SK-LRE Ecoli Dh5a transformatie (heat-shock). L-broth gesuplementeerd met 100 μg/ml kanamycine en 1mg/l bialaphos. QIAprep Spin Miniprep Kit (50) Cat No./ID 27104 om plasmides te isoleren.

Materiaal & Methode Agrobacterium transformatie Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 (dicots) Freeze–thaw methode van Holsters, M., de-Waele, D., Depicker, A., Messens, E., Montagu, V. M., & Schell, J. (1978). Transfection and transformation of Agrobacterium tumefaciens. Molecular and General Genetics, 163, 181–187. De bacterien met de vectoren worden geselecteerd door de strain in LB platen met 1 mg/l bialaphos en 50 mg/l kanamycine bij 28 °C voor 48 h te cultiveren. Een kolonie PCR word uitgevoerd op de transformanten door complementaire primers te ontwikkelen, gebaseerd op de primers KN7, 5′-ATG GGG CCA GTT GTT GAA AAA ATT GC-3′ en KC12, 5′-TCA TAG CTT CAC TTA ACT CCC GCG AA-3′, en te gebruiken. Een ELISA wordt gebruikt om te kijken of de neo-genen tot expressie komen door gebruikt te maken van de Anti-Firefly Luciferase antibody (ab99944). De expressive van luciferase word bepaald door een luciferase assay met D-luciferine.

Materiaal & Methode Ulmus infectie met agrobacterium YEB medium naar 1x MS medium 100mm blad Ulmus (auxine) 2 dagen, 24°C, 70% luchtvochtigheid, 16 uur licht – 8 uur donker Antibiotica, gibberelline en auxine Elke twee weken verschonen tot gewenste grootte bereikt is D-luciferine injectie

Personeel & Organisatie Pyralitech Research BV: Eerste opzet van het bedrijf Bestaat uit management en R&D Ontwikkeling van het product Al het intellectuele eigendom blijft in bezit van deze BV Pyralitech Products BV: Bij succesvol produceren van de bioluminescerende iep Bestaat uit Marketing, Productie, Logistiek Meerdere afdelingen bij uitbreiding naar het buitenland - Bedrijfsmanagement gaat over financiën, personeelszaken, rechtszaken - Research & Development (R&D) ontwikkelt het product en methodes voor productie van het product - Marketing promoot het product aan overheden, gemeentes, particulieren - Productie werkt samen met R&D voor opkweek van de iepen - Logistiek is verantwoordelijk voor import/export en klantgerichte service

Haalbaarheid & Risico Motivatie Idee Persoonskenmerken Grote motivatie voor verbetering van het milieu Pioniers in een nieuwe productomgeving Expressieniveau Instandhouding cyclus Direct resultaat in energie-afname bij implementatie Idee Goed onderbouwd in de trend van milieuverbetering Negativiteit tegenover GMO’s van regering & bevolking is de grootste drempel Bij implementatie mogelijk een doorbraak op dit gebied Persoonskenmerken "De wereld verbeteren" wordt speerpunt van de marketing van ons product Kwaliteit, kennis en ervaring Voldoende ervaring voor ontwikkeling van iep Ondersteuning bij aanvragen van patenten, opzet van een BV, verkoop van het product

Discussie Drie essentiele punten: Het succesvol produceren van een bioluminescerende iep (intern) Aanpassing van de wetgeving om de productie en implementatie van GMO’s te legaliseren (extern) Sociale acceptatie en interesse in GMO’s. (extern)

Conclusie Het bedrijfsplan heeft een reële kans van slagen, mits de modificatie van de iep succesvol verloopt, en er een wettelijke en sociale acceptatie van GMO's bereikt wordt.