In vivo fluorescentie van NADH in gist Geef een fysiologische verklaring voor de NADH fluorescentie veranderingen Betrek hierin ook de heersende zuurstofconcentraties
Wat gebeurt er in de verschillende fases (1- 8)? H2O2 Gehongerde gistcellen worden gesuspendeerd in een aerobe buffer met glucose Aceetaldehyde 6 4 5 3 2 NADH fluorescentie Tijd 1 1 min
Mengen H2O2 8 7 NADH fluorescentie Tijd
Recorderuitdraai van de zuurstofelectrode Gist toegevoegd 230 µM O2 H2O2 Aceetaldehyde [O2] switch = (11/74)x 230 µM 1 min Tijd (min)
Katabolisme van glucose in gist In aanwezigheid van zuurstof zijn actief: glycolyse, citroenzuurcyclus en ademhalingsketen (fase 1) In afwezigheid van zuurstof zijn actief: glycolyse en ethanol productie (samen fermentatie genoemd)
Aerobe afbraak van glycose (pyruvaat) De citroenzuurcyclus vindt plaats in de mitochondriën Reductie equivalenten worden onttrokken aan intermediairen en overgebracht op NAD+ en FAD.
De mitochondriale ademhalingsketen: electronen transport naar zuurstof is gekoppeld aan het opbouwen van een proton motive force
Overzicht over de oxidatieve fosforylering Een proton pompende ademhalingsketen PMF gedreven fosforylering van ADP 2.5 ATP(cytoplasma) / NADH ATP concentratie in het cytoplasma is hoog, AMP is laag 3.3 H+/ ATP
Regulatie katabolisme via de ‘energy charge’ (EC) EC hoog: een afgeremde ademhalingsketen, citroenzuurcyclus en glycolyse. 30 ATP per glucose molecuul geoxideerd tot CO2 en H2O
Als de ademhalingsketen stopt, daalt de energy charge sterk Ademhalingsketen stopt, citroenzuurcyclus stopt, de energy charge daalt sterk. Bij een lage energy charge wordt de glycolyse sterk geactiveerd. NADH moet worden geoxideerd, gaat via fermentatie
Fermentatief katabolisme in gist ATP vorming via substraat gebonden fosforylering in de glycolyse. Export reductie equivalenten via ethanol