Prepareren van niet-gynaecologische monsters ThinPrep® Non-Gynae Presentaties Prepareren van niet-gynaecologische monsters P/N 86223-002 Rev B

Voordelen van de ThinPrep-technologie Het gebruik van ThinPrep Non-Gyn voor niet-gynaecologische specimens: Optimale celpreservatie Standaardisatie van specimenpreparatie Vereenvoudigt de screening Aanvullende onderzoeken mogelijk van aanvullende tests

Materialen In dit deel bespreken we alle benodigdheden die u nodig hebt om uw niet-gynaecologische specimens te prepareren voor de ThinPrep 2000-processor.

Benodigde materialen ThinPrep® 2000-Processor ThinPrep® -objectglaasjes Non-Gyn filters (blauw) Vortexmixer met rekken CytoLyt®- en PreservCyt®-oplossing Deze artikelen kunnen bij Hologic aangeschaft worden.

Benodigde materialen Centrifuge voor buizen van 50 ml Centrifugebuizen van 50 ml Kleuringssysteem voor objectglaasjes en reagentia 1 ml plastic transferpipetten, met meetschaal Standaard laboratoriumfixatief Dekglaasjes en inbedmedia IJsazijn, DTT en zoutoplossing Deze artikelen hebt u waarschijnlijk al in uw laboratorium.

Oplossingen In dit deel bespreken we de oplossingen die aanbevolen worden en de oplossingen die niet aanbevolen worden voor gebruik met het ThinPrep-systeem.

Aanbevolen verzamelmedia CytoLyt® Plasma-Lyte® Polysol® Gebalanceerde elektrolytenoplossingen Deze oplossingen zijn belangrijk voor het verkrijgen van optimale resultaten.

Niet aanbevolen verzamelmedia Mucollexx® Alcohol Vloeistoffen met carbowax Saccomanno Deze oplossingen produceren suboptimale resultaten. Carbowax kan de processor beschadigen en de garantie van het apparaat teniet doen. Alcohol en mucollexx zorgen dat bloed, mucus en eiwit een vaste vorm aannemen.

Niet aanbevolen verzamelmedia Fysiologische zoutoplossing Kweekmedia RPMI PBS Oplossingen met formaline Deze oplossingen zijn niet optimaal voor de conservering van de cel en vergroot de kans op suboptimale celmorfologie.

Hologic Oplossingen CytoLyt -oplossing PreservCyt -oplossing Hologic heeft deze twee conserveringsoplossingen ontwikkeld voor gebruik met de ThinPrep-processors als een volledig systeem. We zullen nu de specificaties en het gebruik van deze oplossingen bespreken.

Hologic Oplossingen CytoLyt Oplossing Gebufferde conserveringsoplossing op basis van methanol lyseren van rode bloedcellen voorkomt precipitatie van proteïnen slijm oplossen handhaaft morfologie van algemene cytologische monsters non-gynae 8 dagen bij kamertemperatuur Met CytoLyt blijft de morfologie van algemeen cytologische monsters non-gynae 8 dagen bij kamertemperatuur bewaard, mits er een minimale verhouding van CytoLyt-oplossing tot monstervolume is van 1:3.

Hologic Oplossingen CytoLyt Oplossing Bedoeld als transportmedium Gebruikt bij de preparatie van het specimen vóór de verwerking

Hologic Oplossingen PreservCyt Oplossing Gebufferde oplossing op basis van methanol om cellen te ondersteunen tijdens het transport en de preparatie van de glaasjes op de ThinPrep 2000-processor Specimens moeten vóór de verwerking in de PreservCyt-oplossing vervoerd en bewaard worden

Hologic Oplossingen PreservCyt Oplossing De PreservCyt-oplossing kan niet vervangen worden door andere reagentia Cellen in PreservCyt-oplossing kunnen ongeveer 3 weken bij een temperatuur van 4°-37 °C bewaard worden

Monsters verzamelen en prepareren In de komende sectie bespreken we de ideale verzamelingsprocedures en preparatietechnieken.

Verzameling Fijne-naaldaspiraties Plaats en spoel het hele monster in een centrifugeerbuis met 30 ml CytoLyt-oplossing of in een gebalanceerde elektrolytenoplossing, zoals Polysol of Plasma-Lyte

Verzameling Slijmbevattende (mucoïde) specimens Rechtstreeks in 30 ml CytoLyt®-oplossing verzamelen Aan een vers monster dient u zo spoedig mogelijk 30 ml CytoLyt-oplossing toe te voegen Bij 'slijm' inbegrepen: respiratoire specimens en sommige GI-specimens Monsters met een groot volume > 20 ml moeten met behulp van centrifugatie geconcentreerd worden voordat de CytoLyt-oplossing toegevoegd wordt. Toevoeging van 30 ml Cytolyt aan het monster conserveert het monster en begint het oplossingsproces van het slijm.

Verzameling Slijmbevattende of Mucoïde specimens Sputum: Rechtstreeks in de CytoLyt®-oplossing verzamelen Wassen/spoelen: Met een gebalanceerde elektrolytenoplossing (BES) verzamelen Borstelen: Het verzamelborsteltje rechtstreeks in een buis plaatsen die voorgevuld is met CytoLyt-oplossing

Verzameling Vloeibare specimens Concentreer een vers monster door middel van centrifugatie voordat u de CytoLyt®-oplossing toevoegt Als dit niet mogelijk is, verzamelt u de monsters rechtstreeks in de CytoLyt-oplossing Gebruik minimaal 1 deel CytoLyt op 3 delen monster Bij 'vocht' inbegrepen: Urine, BCF's, CSV, vocht uit cyste Vloeistoffen die in CytoLyt verzameld zijn, moeten gewassen worden voordat ze op de T2 kunnen worden verwerkt. We zullen de procedure hiervoor later bespreken...

Verzameling Oppervlakkige Specimens Oppervlakkige met de borstel verkregen monsters en schraapsels worden rechtstreeks in de PreservCyt®-oplossing verzameld Bij 'oppervlakkige monsters' inbegrepen: orale schraapsels, tepeluitvloed, anale pap-tests, tzanck-tests, enz...

Fijne-naaldaspiraties Preparatie Fijne-naaldaspiraties Concentreer het specimen dmv centrifugatie Giet het supernatant af en resuspendeer de pellet Evalueer de celpellet Voeg het specimen toe aan de flacon met de PreservCyt®-oplossing Laat 15 minuten staan Verwerk op de ThinPrep-processor met cyclus 2 Fixeer, kleur en evalueer Als het specimen in BES verzameld is, vervangt u dit eerst door 30 ml CytoLyt. In de volgende sectie worden de specifieke stappen voor iedere voorbereidende stap besproken.

Slijmbevattende of mucoïde specimens Preparatie Slijmbevattende of mucoïde specimens Mechanische agitatie Concentreer het specimen via centrifugatie Giet het supernatant af en resuspendeer de pellet Evalueer de celpellet Voeg het specimen toe aan de flacon met de PreservCyt®-oplossing Laat 15 minuten staan Verwerk op de ThinPrep-processor met cyclus 3 Fixeer, kleur en evalueer Van het gebruik van dithithreitol (DTT) is aangetoond dat het de hoeveelheid slijm in respiratoire monsters vermindert. Als u DTT wilt gebruiken met het ThinPrep-systeem, bereidt u een voorraadoplossing door 2,5 g DTT toe te voegen aan 30 ml CytoLyt-oplossing. Deze oplossing kan 1 week gebruikt worden mits hij op kamertemperatuur (15-30 graden C) bewaard wordt. Voeg 1 ml voorraadoplossing aan het monster toe voordat u gaar vortexen.

Preparatie Vloeibare specimens Concentreer het specimen dmv centrifugatie Was in CytoLyt-oplossing   Giet het supernatant af en resuspendeer de pellet Evalueer de celpellet Voeg het specimen toe aan de flacon met de PreservCyt®-oplossing Laat 15 minuten staan Verwerk op de ThinPrep-processor met cyclus 2 Fixeer, kleur en evalueer         Begin bij erg bloederige vloeistoffen met slechts 10 ml verse vloeistof.

Monsterbereidingstechnieken

Centrifugatie 600g x 10 minuten Concentreer het celmateriaal om de celcomponenten te scheiden van het supernatant In de tabel met centrifugeersnelheden op pagina 1.14 van de gebruikershandleiding van de ThinPrep® 2000 (sectie Niet-gynaecologisch) wordt aangegeven welke snelheid uw centrifuge nodig heeft om een kracht van 600 g te krijgen

Mechanische agitatie Slijmbevattende of mucoïde specimens Methode A Schud de CytoLyt®-oplossing gedurende 5 minuten met een handsfree vortexmixer Methode B Meng het CytoLyt/monstermengsel een paar seconden

Giet het supernatant af Deze stap dient om het monster te concentreren Keer de centrifugeerbuis met een soepele beweging 180° om, giet het supernatant af en breng de buis weer terug in de uitgangspositie Als het supernatant niet helemaal wordt afgegoten, kan het monster weinig cellen bevatten omdat de celpellet verdund is.

Schud om celpellet te hersuspenderen Deze stap dient om de celpellet te randomiseren en de resultaten van de wasprocedure met de CytoLyt®-oplossing te verbeteren Plaats de centrifugeerbuis op een vortexmixer en schud 3 seconden, of hersuspendeer handmatig door de pellet een paar keer met een plastic pipet op te zuigen en uit te spuiten

Wassen met CytoLyt Deze stap dient om de celmorfologie te handhaven, rode bloedcellen te lyseren, slijm op te lossen en de precipitatie van proteïnen te beperken Voeg 30 ml CytoLyt-oplossing toe aan een celpellet, centrifugeer, giet het supernatant af en vortex om de celpellet te hersuspenderen Eén spoeling is gewoonlijk voldoende om de meeste niet-gynaecologische monsters te reinigen.

Evalueer de celpellet Als de celpellet wit, lichtroze, beige of onzichtbaar is Voeg het specimen toe aan de flacon met de PreservCyt-oplossing

Evalueer de celpellet Als de celpellet duidelijk rood of bruin is, duidt dit op de aanwezigheid van bloed Wassen met CytoLyt Voeg 30 ml CytoLyt-oplossing toe Concentreer het specimen dmv centrifugatie Giet het supernatant af Vortex om de celpellet te hersuspenderen

Evalueer de celpellet Om de oplossing te testen, zuigt u een kleine hoeveelheid van het monster in een pipet en laat u deze terugdruppelen in de buis Als de druppels draderig of geleiachtig lijken, moet het slijm vloeibaarder gemaakt worden

Evalueer de celpellet Was in CytoLyt-oplossing Voeg 30 ml CytoLyt®-oplossing toe Mechanische agitatie Concentreer het specimen dmv centrifugatie Giet het supernatant af Vortex om de celpellet te hersuspenderen

Voeg specimen toe aan flacon met PreservCyt Als de pellet duidelijk zichtbaar is en het pelletvolume < 1 ml is vortext u de pellet en brengt u 2 druppels over naar een flacon met een verse PreservCyt-oplossing

Voeg specimen toe aan flacon met PreservCyt-oplossing Als het pelletvolume > 1 ml is voegt u 1 ml CytoLyt-oplossing toe aan de buis en vortext kort om de celpellet opnieuw in suspensie te brengen brengt u 1 druppel van het specimen over naar een flacon met een verse PreservCyt-oplossing

Voeg specimen toe aan flacon met PreservCyt-oplossing Als de pellet niet zichtbaar of te klein is voegt u de inhoud van een flacon met verse PreservCyt-oplossing aan de buis toe en vortex dit kort om de oplossing te mengen Giet het hele monster terug in de flacon

Problemen oplossen

Slijmbevattende of mucoïde specimens Bericht „Monster is verdund“ Controleer of er voldoende cellen aanwezig zijn. Als dit niet het geval is, gebruikt u zo mogelijk meer van de pellet. Ja Indien Ja, controleer of er voldoende cellen aanwezig zijn. Als dit niet het geval is, gebruikt u zo mogelijk meer van de pellet. Prepareer een glaasje met cyclus 3. Nee

Slijmbevattende of mucoïde specimens Verdun het monster en voeg het toe aan de flacon met de PreservCyt-oplossing. Als een halo zichtbaar is op het nieuwe glaasje, neemt u contact op met de technische dienst van Hologic. Heeft het glaasje een 'halo' van celmateriaal en/of witte bloedcellen? Ja Indien Ja, verdun het monster 20:1. Gebruik een gekalibreerde pipet om 1 ml van het monster aan een flacon met een nieuwe PreservCyt-oplossing toe te voegen. Prepareer een glaasje met cyclus 1. Nee

Slijmbevattende of mucoïde specimens Bevat het glaasje weinig materiaal of is er slijm aanwezig? Centrifugeer, giet af en vortex. Was met CytoLyt®-oplossing. Als het glaasje te weinig materiaal bevat, neemt u contact op met de technische dienst van Hologic. Ja Indien Ja: giet de inhoud van de flacon met PreservCyt in een centrifugeerbuis. Concentreer het monster dmv centrifugatie. Giet het supernatant af en vortex om de celpellet opnieuw in suspensie te brengen. Spoel met de CytoLyt-oplossing en evalueer het uiterlijk van de celpellet. Als de pellet slijm bevat, herhaalt u de spoeling met de CytoLyt-oplossing. Voeg het specimen toe aan de flacon met PreservCyt en prepareer een glaasje met cyclus 2. Nee Neem contact op met de technische dienst van Hologic

Bericht „Monster is verdund“ Specimens met bloed of eiwitten Controleer of er voldoende cellen aanwezig zijn. Als dit niet het geval is, gebruikt u zo mogelijk meer van de pellet. Bericht „Monster is verdund“ Ja Ja: Controleer of er voldoende cellen aanwezig zijn. Als dit niet het geval is, gebruikt u zo mogelijk meer van de pellet. Prepareer een glaasje met cyclus 2. Nee

Heeft het glaasje een 'halo' van celmateriaal en/of witte bloedcellen? Specimens met bloed of eiwitten Heeft het glaasje een 'halo' van celmateriaal en/of witte bloedcellen? Verdun het monster en voeg het toe aan de flacon met de PreservCyt-oplossing. Als een halo zichtbaar is op het nieuwe glaasje, neemt u contact op met de technische dienst van Hologic. Ja Ja: Verdun het monster 20:1. Voeg 1 ml van het monster toe aan een flacon met nieuwe PreservCyt-oplossing. Prepareer een glaasje met cyclus 1. Nee

Specimens met bloed of eiwitten Bevat het glaasje weinig materiaal of bloed, eiwit of acellulair materiaal? Centrifugeer, giet af en vortex. Als het glaasje te weinig materiaal bevat, neemt u contact op met de technische dienst van Hologic. Ja Ja: giet de inhoud van de flacon met PreservCyt in een buis. Concentreer het monster dmv centrifugatie. Giet het supernatant af en vortex om de celpellet te hersuspenderen. Als het monster bloed of acellulair materiaal bevat, mengt u 9 delen CytoLyt-oplossing met 1 deel ijsazijn en voegt 30 ml van deze oplossing toe aan de centrifugeerbuis met het monster. Als het monster eiwit bevat, voegt u 30 ml zoutoplossing toe aan de centrifugeerbuis, concentreer, giet af en breng opnieuw in suspensie. (Herhaal deze stappen als de pellet nog steeds bloed of eiwit bevat). Voeg dit toe aan de flacon met PreservCyt en prepareer een glaasje met cyclus 2. Nee Neem contact op met de technische dienst van Hologic

Veel voorkomende artefacten Details van kern vlekkerig Kan veroorzaakt worden door het gebruik van PBS, zoutoplossing of RPMI als verzamelvloeistof - Verzamel het monster vers in CytoLyt®-oplossing of in een gebalanceerde elektrolytoplossing Probleem: details van kern vlekkerig. Kan veroorzaakt worden door het gebruik van PBS, zoutoplossing of RPMI als verzamelvloeistof. Oplossing: Verzamel het monster in de CytoLyt-oplossing of in een gebalanceerde elektrolytoplossing.

Veel voorkomende artefacten Halo-Effect In compacte specimens wordt soms alleen de buitenste rand van het celmateriaal op het glaasje overgebracht Als het glaasje onbevredigend is, kunt u een ander maken; gebruik daarvoor de eerder besproken probleemoplossingsprocedures Probleem: halo-effect. In compacte specimens wordt soms alleen de buitenste rand van het celmateriaal op het glaasje overgebracht. Oplossing: Als het glaasje onbevredigend is, kunt u er nog een maken. Maak hierbij gebruik van de bovenstaande procedures voor probleemoplossing.

Veel voorkomende artefacten Kleuringsartefact Het monster vertoont een centrale rode tot oranje kleuring, met name in celclusters, die op luchtdroging lijkt Gebruik verse alcoholbaden of een extra spoelstap na de kleuring van het cytoplasma Probleem: kleuringsartefact. Het monster vertoont een centrale rode tot oranje kleuring, met name in celclusters, die op luchtdroging lijkt. Oplossing: Gebruik verse alcoholbaden of een extra spoelstap na de kleuring van het cytoplasma.

Voor meer informatie… Raadpleeg uw ThinPrep® 2000-gebruikershandleiding

Voor meer informatie… Ga naar onze website www.hologic.com of www.thinprep.com Productcatalogus Contactinformatie Complete gynaecologische en niet-gynaecologische bibliografieën Presentatie van cytologische casus