Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen Ontwikkelen van een methode voor het bepalen van magnesiumglycerofosfaat met HPLC-ELSD Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen Stagementor: Dhr. Gabriël Denolf Stagegever: Dhr. Stefan Daenekynt Promotor: Dhr. Bart Quartier

Inhoudstafel Probleemstelling en doel HPLC ELSD Methode-ontwikkeling Besluit Inhoudstafel

Probleemstelling en doel Mg-bepaling vroeger via titratie Nadelen: Interferentie Niet specifiek Oplossing: HPLC-ELSD Magnesium is niet UV-gevoelig  DAD kan niet gebruikt worden Probleemstelling en doel

HPLC High Performance Liquid Chromatography Scheidingstechniek onder verhoogde druk Stationaire fase: gepakte kolom (hier: ionenuitwisselingskolom) Mobiele fase HPLC

ELSD Evaporative Light Scattering Detection 3 stappen: Verneveling: vorming van aërosol Verdamping: vorming van gesuspendeerde partikels Detectie: gesuspendeerde deeltjes passeren lichtstraal ELSD

Methode-ontwikkeling 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl 3N HCl 100x verdund 3N HCl 100x verdund + 2x verdund Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA 0,1% TFA 0,2% TFA 0,3% TFA 0,15% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min Methode-ontwikkeling

1 Oplosmiddel 0,03N HCl Mobiele fase 0,4% azijnzuur Kolom Prevail C18 Debiet 1mL/ min

Methode 1

1 2 Oplosmiddel 0,03N HCl Mobiele fase 0,4% azijnzuur Kolom Prevail C18 Debiet 1mL/ min 0,5mL/

Methode 2

1 2 3 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl Mobiele fase 0,4% azijnzuur Kolom Prevail C18 Debiet 1mL/ min 0,5mL/

Methode 3 0,007N HCl Methode 3 0,1N HCl

1 2 3 4 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

1 2 3 4 5 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

Methode 5

1 2 3 4 5 6 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA 0,1% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

Methode 6

1 2 3 4 5 6 7 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl 3N HCl 100x verdund Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA 0,1% TFA 0,2% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

Methode 7

1 2 3 4 5 6 7 8 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl 3N HCl 100x verdund Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA 0,1% TFA 0,2% TFA 0,3% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

Methode 8

1 2 3 4 5 6 7 8 9 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl 3N HCl 100x verdund 3N HCl 100x verdund + 2x verdund Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA 0,1% TFA 0,2% TFA 0,3% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Oplosmiddel 0,03N HCl 0,007N tot 0,1N HCl 0,1N HCl 1N HCl 3N HCl 100x verdund 3N HCl 100x verdund + 2x verdund Mobiele fase 0,4% azijnzuur 0,04% TFA 0,06% TFA 0,1% TFA 0,2% TFA 0,3% TFA 0,15% TFA Kolom Prevail C18 Primsep 100 Debiet 1mL/ min 0,5mL/ 0,5mL/min

Methode 10

Standaardreeks

Magnesiumcarbonaat Metarelax Metarelax

Besluit Kolom: Primsep 100 5µm 250mmx4,6mm Kolomtemperatuur: 35°C Debiet mobiele fase: 0,5mL/minuut Injectievolume staal: 10µl Temperatuur ELSD: 40°C Gasflow: 1,5L/minuut Gain: 1 Looptijd: 25 minuten Mobiele fase: water/acetonitril/TFA (30/70/0,15) Oplosmiddel 1mL 3N HCl dat aangelengd wordt tot 100mL met water. Toekomst: Oplosmiddel verder aanpassen Standaardreeks met zuiver magnesium Validatie Besluit

Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen Ontwikkelen van een methode voor het bepalen van magnesiumglycerofosfaat met HPLC-ELSD Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen Stagementor: Dhr. Gabriël Denolf Stagegever: Dhr. Stefan Daenekynt Promotor: Dhr. Bart Quartier