Aortarupturen bij het Friese paard: Focus op morfologie van gladde spiercellen en collageenvezels in de tunica media van de aortawand via immunohistochemische en histologische kleuringen Naam: Chana Callens Stagebegeleider: Kaat Van Oostveldt Stagementor: Catherine Delesalle en Margreet Ploeg Stageplaats: Universiteit Utrecht, faculteit Diergeneeskunde

Inhoud Inleiding Aortarupturen bij het paard Immunohistochemische kleuringen Histologische kleuringen Discussie

Inleiding Het Friese paard * 13e eeuw * Inlands paardenras van Nederland * Nauwe stamboom Friese paard In Nederland zijn er ongeveer 40.000 Friese paarden, In België zijn er 500 tot 1.000 Friese paarden aanwezig Warmbloed paard

Inleiding Onderzoek * Pathologie aortarupturen bij het Friese paard achterhalen * 38 onderzochte paarden: - 20 aangetaste Friese paarden - 9 niet aangetaste Friese paarden - 9 warmbloedpaarden * Immunohistochemische kleuringen = gladde spiercellen * Histologische kleuringen = collageen * Microscopische beoordeling 4 gradaties

Inleiding Aorta * Grote lichaamslagader * 3 lagen = - Tunica intima - Tunica media - Tunica adventitia De aorta Opbouw aortawand

Inhoud Aortarupturen bij het paard Inleiding Immunohistochemische kleuringen Histologische kleuringen Discussie

Aortarupturen bij het paard * Warmbloedpaarden = connectieplaats * Friese paarden = 1) Acute vorm 2) Semistabiele vorm 3) Stabiele vorm Fries paard Warmbloed paarden

Aortarupturen bij het Friese paard – Acute vorm Aortaruptuur Aorta

Aortarupturen bij het Friese paard – Semistabiele vorm Cuffing / Mouw rondom aorta Aorta

Aortarupturen bij het Friese paard – Stabiele vorm Scheur in arteria pulmonalis Aorta-pulmonale fistel

Inhoud Immunohistochemische kleuringen Inleiding Aortarupturen bij het paard Immunohistochemische kleuringen Histologische kleuringen Discussie

Immunohistochemische kleuringen ABC/PO Method for Mouse anti SMA (Smooth Muscle Actin) * Indirecte ABC/PO - methode * Aankleuren gladde spiercellen * Scoren oriëntatie gladde spiercellen Het ABC/PO complex bestaat uit een aaneenschakeling van avidinemoleculen, biotinemoleculen en het horseradisch peroxidase enzym. Avidine vertoont ook een affiniteit voor het biotine gelabeld secundair antilichaam en zal hiermee ook een binding aangaan. Binding van het complex is echter niet microscopisch zichtbaar, waardoor in een volgende stap nog een substraat wordt toegevoegd

Immunohistochemische kleuringen Resultaten Smooth Muscle Actin Staining Aangetaste Fries 1 - Normaal beeld van de gladde spiercellen in de tunica media van de aortawand (200x vergroting) Normaal beeld van de gladde spiercellen in de tunica media van de aortawand

Immunohistochemische kleuringen Resultaten Smooth Muscle Actin Staining Aangetaste Fries 2 - Lichte afwijking van de gladde spiercellen in de tunica media van de aortawand (200x) Lichte afwijking van de gladde spiercellen in de tunica media van de aortawand

Inhoud Histologische kleuringen Inleiding Aortarupturen bij het paard Immunohistochemische kleuringen Histologische kleuringen Discussie

Histologische kleuringen Von Gieson voor collageen en spierweefsel * Belangrijkste stappen in het protocol - Weigert’s Haematoxyline - Blauwen in stromend water - Von Gieson oplossing * Aankleuren collageenvezels * Scoren hoeveelheid collageen

Histologische kleuringen Resultaten Von Gieson voor collageen en spierweefsel Warmbloed 1 - Normaal beeld van de collageenvezels in de tunica media van de aortawand (200x) Normaal beeld van de collageenvezels in de tunica media van de aortawand

Histologische kleuringen Resultaten Von Gieson voor collageen en spierweefsel Oude Fries 3 -Lichte toename van de collageenvezels in de tunica media van de aortawand (200x) Lichte toename van de collageenvezels in de tunica media van de aortawand

Histologische kleuringen Resultaten Von Gieson voor collageen en spierweefsel Aangetaste Fries 13 - Toename van de collageenvezels in de tunica media van de aortawand (100x) Toename van de collageenvezels in de tunica media van de aortawand

Inhoud Discussie Inleiding Aortarupturen bij het paard Immunohistochemische kleuringen Histologische kleuringen Discussie

Discussie ABC/PO Method for Mouse anti SMA (Smooth Muscle Actin) * Aangetaste Friese paarden (20) 15 paarden = factor 0 5 paarden = factor 1 of 2 * Controle Friese paarden (9) 9 paarden = factor 0 * Warmbloeden (9) 8 paarden = factor 0 1 paard = factor 1 Besluit * Pathologie aortaruptuur = waarschijnlijk niet te verklaren door de geringe afwijkingen in oriëntatie van gladde spiercellen

Discussie Von Gieson voor collageen en spierweefsel * Aangetaste Friese paarden (20) 11 paarden = factor 0 9 paarden = factor 1 of 2 * Controle Friese paarden (9) 4 paarden = factor 0 5 paarden = factor 1 of 2 * Warmbloeden (9) 8 paarden = factor 0 1 paard = factor 1 Besluit * Pathologie aortaruptuur = waarschijnlijk te verklaren door toename in hoeveelheid collageen in tunica media

Discussie Toekomstperspectief * Elastine Universiteit Gent * Collageen Universiteit Utrecht - Collageen I en III = op punt - Collageen V = volop onderzoek

Aortarupturen bij het Friese paard: Focus op morfologie van gladde spiercellen en collageenvezels in de tunica media van de aortawand via immunohistochemische en histologische kleuringen Naam: Chana Callens Stagebegeleider: Kaat Van Oostveldt Stagementor: Catherine Delesalle en Margreet Ploeg Stageplaats: Universiteit Utrecht, faculteit Diergeneeskunde