In vivo fluorescentie van NADH in gist

Presentatie over: "In vivo fluorescentie van NADH in gist"— Transcript van de presentatie:

1 In vivo fluorescentie van NADH in gist
Geef een fysiologische verklaring voor de NADH fluorescentie veranderingen Betrek hierin ook de heersende zuurstofconcentraties

2 Wat gebeurt er in de verschillende fases (1- 8)?
H2O2 Gehongerde gistcellen worden gesuspendeerd in een aerobe buffer met glucose Aceetaldehyde 6 4 5 3 2 NADH fluorescentie Tijd 1 1 min

3 Mengen H2O2 8 7 NADH fluorescentie Tijd

4 Recorderuitdraai van de zuurstofelectrode
Gist toegevoegd 230 µM O2 H2O2 Aceetaldehyde [O2] switch = (11/74)x 230 µM 1 min Tijd (min)

5 Katabolisme van glucose in gist
In aanwezigheid van zuurstof zijn actief: glycolyse, citroenzuurcyclus en ademhalingsketen (fase 1) In afwezigheid van zuurstof zijn actief: glycolyse en ethanol productie (samen fermentatie genoemd)

6 Aerobe afbraak van glycose (pyruvaat)
De citroenzuurcyclus vindt plaats in de mitochondriën Reductie equivalenten worden onttrokken aan intermediairen en overgebracht op NAD+ en FAD.

7 De mitochondriale ademhalingsketen: electronen transport naar zuurstof is gekoppeld aan het opbouwen van een proton motive force

8 Overzicht over de oxidatieve fosforylering
Een proton pompende ademhalingsketen PMF gedreven fosforylering van ADP 2.5 ATP(cytoplasma) / NADH ATP concentratie in het cytoplasma is hoog, AMP is laag 3.3 H+/ ATP

9 Regulatie katabolisme via de ‘energy charge’ (EC)
EC hoog: een afgeremde ademhalingsketen, citroenzuurcyclus en glycolyse. 30 ATP per glucose molecuul geoxideerd tot CO2 en H2O

10 Als de ademhalingsketen stopt, daalt de energy charge sterk
Ademhalingsketen stopt, citroenzuurcyclus stopt, de energy charge daalt sterk. Bij een lage energy charge wordt de glycolyse sterk geactiveerd. NADH moet worden geoxideerd, gaat via fermentatie

11 Fermentatief katabolisme in gist
ATP vorming via substraat gebonden fosforylering in de glycolyse. Export reductie equivalenten via ethanol