Applicatie Specialist LAL ENDOTOXINES & DIALYSE VDT dag 1 November 2006 Yvonne Bos Applicatie Specialist LAL Sanbio bv.

SANBIO BV. WWW.SANBIO.NL Uden, sinds 1978, ISO 9001:2000 14 werknemers in 2006 Distributeur in BeNeLux o.a. Charles River Endosafe Pharmaceutische Industrie Fresenius Be Ziekenhuis Apotheken

ENDOTOXINES & DIALYSE Wat zijn endotoxines Endotoxines in de dialyse Wat is de LAL test PTS

WAT ZIJN ENDOTOXINES Deeltjes van Gram negatieve bacteriën welke koorts op kunnen wekken bij de patient Met name Lipopolysacharide (LPS) LPS komt overal in onze omgeving voor LPS is moeilijk te verwijderen!

ENDOTOXINES IN DE DIALYSE EP/FDA limit: 5 EU/kg/uur Persoon 70 kg * 5 EU/kg = 350 EU/uur Heamodialyse: Flow 500 ml/min = 30 l Hemo (dia) filtratie: Flow 350 ml/min = extra 21 l vloeistof 30 l/uur -> limit 350 EU/ 30.000ml = 0,01 EU/ml 51 l/uur-> limit 350 EU/ 51.000ml = 0,007 EU/ml Volume dialyse  Endotoxine limiet 

ENDOTOXINES IN DE DIALYSE Kwaliteitsrichtlijn Nederlandse Federatie voor Nefrologie , DGN-watercommissie Achtergrond endotoxinen. De maximale hoeveelheid endotoxinen waaraan een patiënt via de intraveneuze route mag worden blootgesteld bedraagt 5,0 IU/kg/uur. Bij hemo(dia)filtratie komen grote hoeveelheden vloeistof per dag in contact met het bloed van een patiënt, soms wel 60 liter per uur. De bepalingslimiet van de meest gevoelige gangbare test op bacteriële endotoxinen bedraagt 0,025 IU/ml. Wanneer wordt aangehouden dat de uitslag onder de detectielimiet dient te liggen,bedraagt bij een patiënt van 70 kg de belasting 1500 IU/uur dus 21 IU/kg/uur, dus veel meer dan de gewenste 5 IU/kg/uur. De beperkende factor is hier de gevoeligheid van de bepalingsmethode: de norm zou strenger moeten zijn, maar er is geen bepalingsmethode beschikbaar om zo’n strengere norm te controleren.

HET AANTONEN VAN ENDOTOXINES Endotoxines worden aangetoond mbv. LAL test. LAL: Limulus - genus van “Horseshoe Crab” Amoebocyte - bloedcellen krab Lysate – bloedextract LAL geeft een chemische reactie in de aanwezigheid van celdelen van gram negatieve bacteriën. Deze reactie kan worden gemeten en gekwantificeerd

HORSESHOE CRAB/ DEGENKRAB 150 miljoen jaar oud Behoort tot de Spinachtigen Komt voor aan de oostkust van de noordelijke continenten (US, China, Vietnam) Legt gemiddeld 80,000 eieren gedurende paartijd in het voorjaar

HET VERKRIJGEN VAN HET LYSAAT De krabben komen in het voorjaar aan land om te paren Ze worden dan verzameld, geinspecteerd en gereinigd Maximaal 25% van hun (blauwe) bloed wordt afgetapt De krabben wordt snel terug gebracht naar zee Charles River werkt nauw samen met plaatselijke autoriteiten om de populatie in stand te houden

DE LAL TEST 5 Methodes: Gel Cloth (tot 0,015 EU/ml) Kinetisch Chromogeen (tot 0,005 EU/ml) Kinetisch Turbidimetrisch (tot 0,005 EU/ml) Chromogeen Endpoint (tot 0,012 EU/ml) Portable Test System (tot 0,01 EU/ml)

DE LAL TEST OP DE APOTHEEK

DE LAL TEST OP DE APOTEEK Afhankelijk van testschema lab -> resultaten binnen 3 dagen tot 2 weken Resultaten zijn indicatie: LPS loopt soms af “Correctie achteraf” Laagst haalbare limiet 0,005 EU/ml Let op monstername & Interference!

PORTABLE TEST SYSTEM (PTS) Real time results -> binnen 15 min. Ter plaatse resultaat Onafhankelijk van laboratorium Minimale training Monitoring!! Laagst haalbare limiet 0,01 EU/ml

PTS TECHNOLOGIE Taking a closer look at the cartridge. The filling process is completely automated. Reagents are loaded onto the cartridges and undergo a drying process. The cartridge consists of a sample well where 25 uL are pipetted in the well; channels with reagents and an optical eye for reading of the reaction. The test process consists of loading the sample in the well where a vaccuum pump draws it into the channel, the sample goes through a mixing stage within the channel before it moves down to the optical eye and the reaction is measured.

ASSAY PROCEDURE - Voer gegevens in als naam, lotnummer en sample ID - Voeg 25 µl sample toe aan de 4 channels - Lees na 15 min. de resultaten af

BEDANKT VOOR UW AANDACHT…… VRAGEN? Sanbio b.v., te UDEN, Tel. 0413 251115 ybos@sanbio.nl, www.sanbio.nl