Optimalisatie van het isoleren en in cultuur brengen van osteocyten

Slides:



Advertisements
Verwante presentaties
DNA.
Advertisements

Acute promyelocytenleukemie
Bloed en lymfe Blz. 39.
Nieuwe loopbaanvisies
Regulation of calcium-sensing receptor by amyloid-beta-42: implications for Alzheimer’s disease  2ste Master Biomedische Wetenschappen Jabar Zada Freba.
Fysica van het Dagelijks Leven
Relaties in de natuur Planten produceren zuurstofgas
Bloedsomloop 3 HAVO/VWO Thorbecke.
Samenvatting H3 Gaswisseling
Hairy cell leukemie (HCL) ‘pluizebolleukemie’
Beenmergonderzoek: informatie over een beenmergpunctie
Universitair Medisch Centrum Groningen
Inleiding. inleiding weefsels worden gevormd door cellen met hun intercellulaire materie worden opgebouwd door één of meer celtypen, waarbij de cellen.
Cindy Lecluyse Promotor: Bart Quartier Stagementoren: Soraya França Sarah Van Beneden Stagegever: Prof. dr. ir. Monica Höfte.
Zwaenepoel Sofie Dienst anatome pathologie: Dr. Prof. M. Praet
Afstudeer Presentatie Application of the Wavelet Transform Modulus Maxima method to T-wave detection in cardiac signals Pieter Jouck 22/12/2004.
KULeuven: fermentatie van hydrolysaat
AL amyloidose oorzaak, klachten en behandeling
Cytotoxische T-lymfocyt-geassocieerd antigen 4 speelt een essentiële rol in de functie van CD25+CD4+ regulatoire cellen die de intestinale inflammatie.
Cellen Een organisme bestaat uit orgaanstelsels die bestaan uit organen die bestaan uit weefsels die bestaan uit cellen.
EASBFZ01K => Modulewijzer + ppt per week op med.hro.nl/kesmh/EASBFZ01K Les 1 Inleiding: Functies van bloed Les 2 Anemie / Hemoglobinopathie Les 3.
B. Stof 9 MITOSE 1 BIOPLEK BEKIJK DEZE ANIMATIE EEN PAAR KEER
HAVO 4 Thema 1: Inleiding in de biologie Boek: Biologie voor jou Deel: HAVO A.
1BAO2KWIZERA ORGAN CYNTHIA ONTWIKKELINGEN IN DE DIAGNOSTIEK EN BEHANDELING VAN LEUKEMIE BIJ KINDEREN MET DOWNSYNDROOM.
Junior Agenant, Tewabu Sheferaw, Serena Maroquin
Wat is kinderkanker?.
Multiculturele binnenwereld Observaties uit de psychoanalytische psychotherapie bij de niet- westerse allochtonen Wouter Gomperts.
Urine Exosomen Hype or Future Jeroen Deegens Afdeling Nierziekten Radboudumc Renal Highlights
Ontwikkelingsaandoeningen Invloed voeding,. Snelle groei grote rassen Fokdoel om groot te fokken Eigenaren vinden dit “mooi”. Hoe groter, hoe meer kans.
Primaire en secundaire immuunreactie 1 Bij het eerste contact tussen het waterpokkenvirus en B-cellen worden geheugen B-cellen en plasmacellen.
Vergelijking van twee commerciële Kleihauer-Betke kleuringen voor bepaling van foetaal bloed Lindsay Vanhuyse Stagementor: Apr. Eline Verhoye Stagebegeleider:
Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats:
Student: Ilse Brouckaert Stagementor: Dr. Inge Van haute & Apr. Stefanie Desmet Promotor: Anneleen Cottyn Stageplaats: AZ Delta.
I MMUNOHISTOCHEMISCHE DETECTIE VAN LMP 1 IN LYMFOPROLIFERATIEVE AANDOENINGEN Dienst Pathologische anatomie UZ Gent Begeleiders: Laura Vermeulen Prof. Dr.
Inleiding Experimenteel Resultaten en discussie Besluit 2.
Op de afdeling Hemodialyse.  Inhoud: Medicatie: werking Medicatie: bijwerking Risico’s Juiste applicatie Vragen P.Leclaire.
Karakterisering van tannines uit tropische planten door middel van spectrofotometrie Stagegever en stagementor: prof. dr. ir. Geert Janssens & dr. Marta.
Selectie en validatie van interne controles voor immuunhistochemie
Aortarupturen bij het Friese paard: Focus op morfologie van gladde spiercellen en collageenvezels in de tunica media van de aortawand via immunohistochemische.
Student: Jana Defever Stageplaats: UZ Gent (ARG) Stagebegeleidster: Cottyn A. Stagegever: Tilleman K. Stagementor: De Roo Chloë Laser capture microdissection.
Student: Sieglinde Pattyn Stagementor: Dr. N. De Wever
Optimalisatie van het maken van paraffineblokjes voor cytologische puncties (type EBUS-EUS) JOKE DAVID 1.
VALIDATIE VAN DE DIGITALE SCANNER: HET PEGASUS-PROJECT.
Vergelijkende studie van twee methodes voor de bepaling van hoog-risico HPV AXEL DEMUYNCK BACHELORPROEF MLT HOWEST
Skelet en spieren. Skelet Ondersteuning Aanhechting Beweging Bescherming Vorming bloedcellen.
Verificatie van ChromID CPS Elite Julie Van De Velde Medische laboratoriumtechnologie Howest Brugge Stageplaats: AZ Groeninge te Kortrijk Stagementor:
Eric de Zeeuw 15 december Enchondrale verbening 1.Kraakbeencellen in midden worden groter en sterven af terwijl matrix verkalkt 2.Nieuwe osteoblasten.
Toelichting Masterproef
Bachelorproef biomedische laboratoriumtechnologie
Daphne Seys Buitenlandse stage gevolgt aan Dublin city university
Pathologisch Laboratorium - AZ Sint-Lucas te Gent Jolien Pollet
3. Het urinevormend apparaat
De huid in beweging Hst. 1 Cellen en weefsels (blz. 9 t/m 23)
Metabolisatiestudie van methyldienolone en methyltrienolone aan de hand van het in vivo chimeer uPA+/+-SCID muismodel en in vitro humane lever microsomen.
Bachelorproef Academiejaar Cédryck Pauwels FBT
Basiskennis bacteriologisch onderzoek
Weefselonderzoek, weefsels en organen
Student: Celine Brusselle Mentor: Dr. Bart Lelie Promotor: Ellen Decat
12.4 Dissimilatie Dissimilatie is het afbreken van grotere moleculen in kleinere, waarbij energie vrijkomt en wordt vastgelegd in de vorm van ATP. Deze.
Toelichting Masterproef
Basiskennis bacteriologisch onderzoek
Biologie   studie van het leven Wat is leven? Een unieke ordening van moleculen (ligt vast in DNA) Stofwisselingsprocessen (enzymen) Zelf kunnen.
Eerste eigenschap van de microscoop:
Thema 1: Onderzoeken 1 HV.
Samenstelling van het bloed
Ruimtewerking Beeldaspect Ruimte.
Gijs Huijbregts, Niels Tielemans, MTD1A4
Eerste eigenschap van de microscoop:
Poli Flebologie EVLT Behandeling..
Transcript van de presentatie:

Optimalisatie van het isoleren en in cultuur brengen van osteocyten Laura Vernieuwe MRB afdeling reumatologie Stagementor: Dr. Stijn Lambrecht Promotor: Griet Vanbillemont

Inhoudsopgave 1. Inleiding en probleemstelling 2. Cellen in het bot 3. Methode 4. Resultaten en discussie 5. Besluit en toekomstperspectief

1. Inleiding en probleemstelling Ideaal: In vitro cultuur van osteoblasten, osteocyten en osteoclasten. Osteocyten: Diep gelegen in matrix van het bot Niet of moeilijk te differentiëren uit precursoren  Bestaand protocol optimaliseren voor het isoleren en opkweken van osteocyten uit botjes van muizen.

2. Cellen in het bot Osteoblasten Precursor: mesenchymale stamcellen Kubisch tot cilindrisch Botvorming Leven slechts enkele weken  Osteocyt  Inactieve osteoblast  Apoptose

2. Cellen in het bot Osteoclasten Precursor: hematopoëtische stamcellen Meerdere kernen Botafbraak Samenspel osteoblasten en osteoclasten  remodellering van het bot

2. Cellen in het bot

2. Cellen in het bot Osteocyten Precursor: mesenchymale stamcellen Langlevende cellen Liggen in lacunes Cytoplasma uitlopers Functie: Mechanosensorische cellen Handhaven van calcium in bloed

2. Cellen in het bot

3. methode Dissectie van de muis Verwijderen achterpoten muis Vel en haren verwijderen 70% ethanol Beenmerg verwijderen Botjes kleiner maken Isoleren van osteocyten  3 verschillende protocols

3. Methode Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) Fractie Protocol 1 Protocol 2 Protocol 3 Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) 2 3 4 EDTA (30min.) 5 EDTA (20min.) Collagenase (30min.) 6 Botjes kleiner maken 7 8 EDTA (1uur) 9

3. Methode Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) Fractie Protocol 1 Protocol 2 Protocol 3 Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) 2 3 4 EDTA (30min.) 5 EDTA (20min.) Collagenase (30min.) 6 Botjes kleiner maken 7 8 EDTA (1uur) 9

3. Methode Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) Fractie Protocol 1 Protocol 2 Protocol 3 Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) 2 3 4 EDTA (30min.) 5 EDTA (20min.) Collagenase (30min.) 6 Botjes kleiner maken 7 8 EDTA (1uur) 9

3. Methode Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) Fractie Protocol 1 Protocol 2 Protocol 3 Ethanol (15sec.) Ethanol (15sec.) / 1 Collagenase (20min.) 2 3 4 EDTA (30min.) 5 EDTA (20min.) Collagenase (30min.) 6 Botjes kleiner maken 7 8 EDTA (1uur) 9

3. Methode In cultuur brengen van de cellen Protocols 1 & 2  6 wellplaat Protocol 3  24 wellplaat FBS coating CO2 incubator Osteocalcine kleuring Kleuren osteoblasten en osteocyten

4. Resultaten en discussie Celopbrengst per fractie voor incubatie Protocols 1 & 3 Protocol 2

4. Resultaten en discussie Celopbrengst per fractie voor incubatie Protocols 1 & 3 Protocol 2

4. Resultaten en discussie Celopbrengst per fractie voor incubatie Protocols 1 & 3 Protocol 2

4. Resultaten en discussie Celopbrengst per fractie voor incubatie Protocols 1 & 3 Protocol 2

4. Resultaten en discussie Totale celopbrengst per protocol

5. Resultaten en discussie Aantal cellen in botfractie na 8 dagen incubatie (protocol 3)

5. Resultaten en discussie Veel fibroblasten

5. Resultaten en discussie Osteocalcine kleuring  protocol 3 botfractie met FBS coating Negatieve controle

5. Resultaten en discussie Osteocalcine kleuring

6. Besluit en toekomstperspectief Niet te lang behandelen met 70% ethanol Botjes kleiner maken FBS coating Gevoelig voor splitsen  Optimalisatie omtrent isolatie, groeiomstandigheden en controle kleuring

Optimalisatie van het isoleren en in cultuur brengen van osteocyten Laura Vernieuwe MRB afdeling reumatologie Stagementor: Dr. Stijn Lambrecht Promotor: Griet Vanbillemont

3. Methode Dissectie van de muis Vel met haren verwijderen door knieschijf vast te nemen en aan het vel te trekken Botjes met zacht weefsel weken in steriele PBS Zacht weefsel en periost verwijderen door schrapen met scalpel Verkregen botten 15sec. onderdompelen in 70% ethanol Botten wassen met steriele PBS Epifyse afsnijden en beenmerg verwijderen met steriele PBS door middel van een injectiespuit Botten wassen, snijden in de lengte en kleiner maken in 1 – 2mm stukjes om het oppervlak te vergroten. Stukjes bot overbrengen in een epje

3. Methode Osteocalcine kleuring Medium afnemen Fixeren met 200µL 4% paraformaldehyde (15min. op KT) 200µL 0,1% Triton X-100 (4min. op ijs) 200µL 1% BSA (2h op KT) 200µL primair AL (1h op 37°C) Wassen met 200µL PBS (3x) 200µL secundair AL (30min. op 37°C in het donker) 1 druppel DAPI Afdekken met een draagglaasje Bekijken met een fluorescentiemicroscoop