Validatie en implementatie van MALDI-TOF MS in een klinisch microbiologisch lab Shana Vervaecke

Probleemstelling en doel Selectieve media en biochemische testen o Tijdsrovend o Arbeidsintensief o Duur o Ervaring nodig MALDI-TOF MS o Snellere identificatie o Goedkoper 2

MALDI-TOF MS 3

4

MALDI-TOF scores 5

Validatie plan Betrouwbaarheid op MALDI-TOF ID Reproduceerbaarheid op MALDI-TOF ID Leeftijd cultuur van MALDI-TOF ID Stabiliteit van kiem op Maldi target 6

Betrouwbaarheid 321 gekende kiemen MALDI-TOF vs alternatieve methoden 7

Betrouwbaarheid 281/321 kiemen met ID hoger dan 1, /281 kiemen met correcte ID 8

Betrouwbaarheid 9

Streptococcen (N=70) Beta-hemolytische Streptococcen (N=30) o 100% ID scores ≥ 2,000 Alfa-hemolytische Streptococcen (N=40) o 17,5% ID scores ≥ 2,000 o Troebele suspensie van alfa-hemolytische Streptococcen 10

Streptococcus species in bacteriële oplossing Alfa-hemolytische Streptococcus species o S. pneumoniae/S.mitis Probleem bij aanbrengen Troebele suspensie 1 µL suspensie gespot op target 11

Streptococcus species in bacteriële oplossing Troebele suspensieDirecte methode 12 S. pneumoniae/mitis o 71% ID scores ≥ 2,000 S. pneumoniae/mitis o 17,5% ID scores ≥ 2,000

Betrouwbaarheid 13

G- staven: 5% verkeerde ID Shigella o Geen massaspectra in database o Geen onderscheid met massaspectrum E. coli Enterococcus faecalis vs Streptococcus bovis o Gewijzigde nomenclatuur o Vroeger groep D Streptococcen Burkholderia multivorans vs Burkholderia cepacia o Lid van Burkholderia cepacia complex 14

Betrouwbaarheid 15

70% mierenzuur extractie op gisten 6/9 v/d Candida kiemen scores lager dan 2 Dikke eiwitmantel rond gisten Test: o 25 kolonies van 5 Candida species (2x) o Vergeleken met resultaten betrouwbaarheid 16

70% mierenzuur extractie op gisten Met mierenzuurZonder mierenzuur 17 68% ID scores ≥ 2,000 16% ID scores tussen 1,700 en 2,000 16% geen spectrum 33% ID scores ≥ 2,000 11% ID scores tussen 1,700 en 2,000 56% geen spectrum

Reproduceerbaarheid Intrarun variaties o Kiem 8 maal op zelfde target Interrun variaties o 4 verschillende runs o 4 verschillende dagen 18

Reproduceerbaarheid 19

Leeftijd cultuur Zelfde cultuur Meten na: o 24h incubatie o 24h op kamertemperatuur o 48h op kamertemperatuur o … 20

Leeftijd cultuur 21

Stabiliteit van kiem op Maldi target Kiem bedekt met matrix o Kiem op target aanbrengen o Meteen bedekken met matrix o Meten na bepaalde tijd Kiem onbedekt o Kiem op target aanbrengen o Pas bedekken met matrix juist voor het meten o Meten na bepaalde tijd 22

Stabiliteit van kiem op Maldi target Kiem bedekt met matrix o Na 48h: 100% correcte ID Kiem onbedekt o Na 31h: 100% correcte ID 23

Besluit 98% correcte MALDI-TOF identificatie Beperkingen: o Shigella vs E. coli o S. pneumoniae/mitis Gisten: mierenzuur extractie ? Implementatie is een grote meerwaarde Betrouwbaar Goedkoper en sneller dan huidige methoden 24

Toekomstperspectief Uitbreiden database (Bruker) Koppelen aan LIS MALDI-TOF gisten/schimmels: mierenzuur extractie ? 25

Validatie en implementatie van MALDI-TOF MS in een klinisch microbiologisch lab