De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

Verwante presentaties


Presentatie over: "Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06"— Transcript van de presentatie:

1 Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

2 Dopingcontrolelaboratoria -Sinds jaren 60 ontstaan -Sinds 1981 IOC accreditatie -PT -Sinds 2002 WADA accreditatie -ISO ISL en TD: Analytisch/Juridisch/Administratief -PT testen (aangekondigd en blind) -2008: 33 WADA laboratoria wereldwijd DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

3 Dopingcontrolelaboratoria DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

4 DoCoLab – historische evolutie aantal stalen DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

5 DoCoLab – historische evolutie aantal stalen DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

6 DoCoLab – historische evolutie % positieve DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

7 DoCoLab -Enige in Benelux -Ca. 10 de grootste internationaal (aantal routinestalen) wereldwijd 2006: – 1,96% pos -Traditioneel in top 3 % positieve -2 de grootste aantal wet. publicaties/jaar : 24 A1 – 6 onderzoekers DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

8 Scope en toepassingsgebied -Verboden middelen en methodes: OOC -Anaboliserende substanties -Hormonen en gerelateerde  -agonisten -Hormoon antagonisten en modulators -Diuretica en andere maskeermiddelen -M1: Verbetering van het zuurstoftransport -M2: Chemische en fysische manipulatie -M3: Genetische doping DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

9 Scope en toepassingsgebied -Verboden middelen en methodes: IC -Alles OOC -Stimulantia -Narcotica -Cannabinoiden -Glucocorticosteroiden -Verboden middelen in specifieke sporten: IC -Alcohol -Beta-blokkers DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

10 Matrix -Urine -Alle “klassieke” middelen -A-staal 50 ml; B-staal 25 ml -Bloed -Homologe bloedtransfusie -Serum -groeihormoon DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

11 Technieken: ‘70 -TLC -RIA -GC – FID/ECD/NPD DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

12 Technieken: ‘80 -GC – FID/ECD/NPD -HPLC-UV -GC-MS -ELISA DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

13 Technieken: ‘90 -GC –NPD -HPLC-UV -GC-MS n -ELISA -Immunologische testen (hCG) -LC-MS n DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

14 Technieken: Nu - GC-MS n -Immunologische testen (hCG, hGH) -LC-MS n -Gelelectroforese/immunoblotting/ chemiluminescentie -GC/C/IRMS -Flowcytometrie DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

15 Kwaliteitszorg -ISO WADA ISL, TD’s -1 e lijnscontroles: per batch min. 2 negatieve en 1 positieve controle -ISTD’s in alle stalen -2 e lijnscontroles: alle methodes/analysten: min. 1 blinde QC/jaar -3 e lijnscontroles: WADA PT, WAADS PT, CSCQ, dubbel blinde QC -A-staal: screening en confirmatie: onafhankelijke controle -B-staal: extra garanties voor atleet DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

16 Het verhaal van een staal…in het lab -Staalontvangst -Verificatie verzegeling en conformiteit -Verificatie begeleidende documentatie (anonimiteit!) -Registratie en verificatie : e-lab in-house LIMS -Chain-of-custody start -A-staal: analyse – B-staal: diepvries/koelkast DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

17 Het verhaal van een staal…in het lab -Screening -pH en SG -GC/MS: 2 analyses -Narcotica, stimulantia, beta-agonisten, anabolica, aromatase- inhibitoren, THC -LC/MS: 2 analyses -Anabole steroiden, aromatase-inhibitoren, beta-agonisten, corticosteroiden, diuretica en beta-blokkers -hCG (♂) -EPO -HES DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

18 Het verhaal van een staal…in het lab -GC/MS en LC/MS: staalvoorbereiding -aliquotering (bl, sbl, QC) -pH-aanpassing -enzymatische hydrolyse (narcotica, anabolica, aromatase- inhibitoren) -LLE - SPE -OFN -Derivatisatie (GC-MS) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

19 Het verhaal van een staal…in het lab -GC/MS Analyse : 4 Agilent MSD - ANAL-15: GC-MS (SIM); uitprint: 10 p -Steroidprofiel: T, E, DHEA, DHT, Adion, Andro, Etio,… -Ca 45 anabole steroiden, THC, 3 diuretica, 4 andere substanties -ANAL-108: GC-MS (Full scan); 11 p -12 narcotica, ca 60 stimulantia, 6 aromatase inhibitoren, 5 andere substanties DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

20 Het verhaal van een staal…in het lab -LC/MS Analyse: 2 Thermo LCQ en 2 Thermo TSQ - ANAL-09*: LC-MS n (ESI; polarity switching) -26 diuretica -21 beta-blokkers -8 andere substanties -ANAL-30: LC-MS n (ESI; polarity switching) -17 anabole steroiden -18 corticosteroiden -8 aromatase inhibitoren -9  -agonisten -6 andere substanties DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06 K. Deventer, P. Van Eenoo and F. T. Delbeke. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005; 19: 90 – 98 * K. Deventer, P. Van Eenoo and F. T. Delbeke. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005; 19: 90–98

21 Het verhaal van een staal…in het lab -EPO en analogen: probleemstelling en mogelijkheden tot detectie - DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

22 Het verhaal van een staal…in het lab Indirect ‣ In bloed ‣ Statistische modellen op basis van bloedparameters: Hematocriet, reticulocyten, macrocyten %, EPO en SolubleTransferrine receptor Direct ‣ In urine ‣ Onderscheid EPO, rhEPO en Aranesp op basis van verschillen in koolhydraten DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

23 Het verhaal van een staal…in het lab -Indirect -Gezondheidscontroles UCI -HCT en Hb -> 50 % en > 17 g/dl (♂) ; 47 % en 16 g/dl (♀) -%reti (<0,20 %) -Stimulatie index = Hb (g/l) - 60 √ reti (%) -> 133 (♂) ; 123 (♀) -Bloedtransfusie (?) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

24 Het verhaal van een staal…in het lab -Hematologische testen: synthetisch hemoglobine DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06 Plasma Haemolyse Hemopure 325 mg/dl

25 Het verhaal van een staal…in het lab -Direct -Concentratie/ opzuivering -Gelelectroforese -Dubbele immunoblotting met selectieve herkenning -Chemoluminescentie -Verwerking via GASEPO en interpretatie DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

26 Het verhaal van een staal…in het lab -Direct -Concentratie/ opzuivering -Concentratie EPO: ca 10 ng/L andere proteines 30 mg/L voudige concentratie -20 ml → 20 µl -Filtratie -MW 30 kDa -Toevoeging protease inhibitoren (complete) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

27 Het verhaal van een staal…in het lab -Direct -Gelelectroforese -EPO: isovormen -huEPO pI 3,7 – 4,7 -rhEPO pI 4,4 – 5,1 -Aranesp pI 3,0-3,9 -Gel: pH-gradient ladingscapaciteit DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

28 Het verhaal van een staal…in het lab -Direct -Dubbele immunoblotting -Primair AB: R&D-systems kloon AE7A5 DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

29 Het verhaal van een staal…in het lab -Direct -Chemiluminescentie en interpretatie DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06 Een staal is positief voor rhEPO indien: Minstens 3 opeenvolgende banden worden onderscheiden, overeenkomend met 1, 2, 3 of 4. De 2 meest intensieve van deze banden moeten opeenvolgend zijn, komen overeen met 1,2 of 3 en zijn 2 maal intensiever dan de meest intensieve band in het endogene gebied. Een staal is positief voor Aranesp indien: Minstens 3 banden worden onderscheiden die overeenkomen met B,C en D. De meest intensieve banden moeten overeenkomen met C en D. De meest intensieve band, C of D, moet intensiever zijn dan elke band in het endogene gebied.

30 Het verhaal van een staal…in het lab -Homologe bloedtransfusie -Bloedtoediening: ABO-systeem, rh(D) -Bijkomende antigenen (C; c; E; e; K1 (Kell); K2(Cellano); Fy a, Fy b, Jk a, JK b, S en s) via flow cytometrie (concentraties) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE % negatief 100% positief mengpopulatie 1% pos

31 Het verhaal van een staal…in het lab -hGH : serum -Natuurlijk mix 22 kDa-isovormen en non-22 kDa isovormen -Recombinant: 22kDa-isovormen -Detectieprincipe: 22kDa/alle isovormen via time resolved immuno-assay -OS Athene en Torino : geen AF’s DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

32 Het verhaal van een staal…in het lab -Testosteron -Endogeen – Exogeen -Indirect: testosteron/epitestosteron >4 -Natuurlijk verhoogde waarde -Vorige waarden -Follow Up -Ca. 30% variatie mogelijk -Direct: 13 C/ 12 C DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

33 Het verhaal van een staal…in het lab -Testosteron -Direct: 13 C/ 12 C -Verschil in 13 C gehalte van endogeen/farmaceutisch T -Ca. 1.1 % alle C in natuur is 13 C -Endogeen: voeding → acetaat → cholesterol → T -Farmaceutisch: uit plantsterolen -Alle C komt finaal uit CO 2, maar bij elke intermediaire stap naar T is er depletie van 13 C DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

34 Het verhaal van een staal…in het lab -Testosteron -Direct: 13 C/ 12 C via GC/C/IRMS -Extractie uit urine -Opzuivering via HPLC -Scheiding via GC (derivatisatie/ongederivatiseerd) -Pyrolyse van C tot CO 2 -Meten 13 CO 2 en 12 CO 2 en vgl met Internat. Std →  -waarden DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

35 Het verhaal van een staal…in het lab -Testosteron -Direct: 13 C/ 12 C  -waarde T, metaboliet of precursor (Andro/Etio/Adiol)  -waarde endogeen steroid onafhankelijk T (11OHAndro, Pregnandiol)  wordt berekend en geëvalueerd -Gevolg: invloed dieet (C4 ↔ C3) wordt beperkt DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06

36 Dankwoord -Alle collega’s van DoCoLab -Het Departement Cultuur, Jeugd, Sport en Media – Dienst Medisch Verantwoord Sporten van de Vlaamse Gemeenschap - DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06


Download ppt "Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences – GE06"

Verwante presentaties


Ads door Google