Download de presentatie
GepubliceerdAnnemie Hendrickx Laatst gewijzigd meer dan 10 jaar geleden
1
Thesisvoorstellen opleiding Apotheker Academiejaar 2007-2008 Dienst FABI
Prof. J. Smeyers-Verbeke Prof. Y. Vander Heyden Prof. J. Plaizier-Vercammen
2
Vakgroep Analytische Scheikunde en Farmaceutische Technologie
Prof. J. Smeyers-Verbeke Prof. Y. Vander Heyden Prof. J. Plaizier-Vercammen
3
Vakgroep Analytische Scheikunde en Farmaceutische Technologie
Wat doen wij? Chemometrie Metrologie Scheidings- technieken
4
Vakgroep Analytische Scheikunde en Farmaceutische Technologie
Doel onderzoek: Evaluatie van nieuwe methodologieĆ«n in scheidingstechnieken Methodeontwikkeling en -optimalisatie Technieken: HPLC, CE, capillaire electrochromatografie Toepassingen: Chirale scheidingen, āsnelleā scheidingen, fingerprinting, geneesmiddelenanalyse Data evaluatie Bv. - Gebruik van experimenteel design - Voorspellen membraanpassage van geneesmiddelen
5
Thesisvoorstel professor Plaizier-Vercammen
6
Onderscheid van de Chinese kruiden Rhizoma Chuanxiong en Rhizoma Ligustici a.d.h.v. VINGERAFDRUK ANALYSE Goedele Alaerts
7
Onderscheid Chinese kruiden
Belang onderzoek kwaliteit van kruiden: Vermageringskuur op basis van chinese kruiden Nefropathie: nierdialyse niertransplantatie Verwisseling Aristolochia fangchi i.p.v.Stephania tetrandra
8
Onderscheid Chinese kruiden
Nood aan identificatie kruiden kwaliteitscontrole kruiden Kruid = complex mengsel ! ? Bepaling enkele componenten Onvoldoende voor intrinsieke kwaliteit
9
Onderscheid Chinese kruiden
Oplossing: fingerprints Karakteristieke vingerafdruk Infra Rood (IR) Massa spectrofotometrie (MS) Dunne laag chromatografie (DLC) Hoge druk vloeistofchromatografie (HPLC) Capillaire Electroforese (CE) Chromatografische fingerprint Geaccepteerd door WHO !
10
Onderscheid Chinese kruiden
Fam. Umbellifera Rhizoma Chuanxiong Rhizoma Ligustici <<< 0.05 % ferulic acid > 0.05 % ferulic acid
11
Onderscheid Chinese kruiden
Identificatie van analoge species of subspecies en differentiatie van gelijkende kruiden. Uiterlijk ? DLC analyse ? Gaf reeds problemen voor bedrijf (Conforma N.V.) Fingerprint analyse dmv HPLC/DAD: ā»HPLC: hoog scheidingsvermogen (t.o.v. DLC) ā»DAD: 3D beeld componenten kruid
12
Onderscheid Chinese kruiden
Chuanxiong Ligustici
13
Onderscheid Chinese kruiden
VINGERAFDRUK ANALYSE => Onderscheid Rhizoma Chuanxiong en Rhizoma Ligustici Experimenteel deel: Fingerprint ontwikkeling en optimalisatie d.m.v. HPLC/DAD Gehaltebepaling Ferulic acid en methodevalidatie Dataverwerking: Hoe ļ¹ kruiden onderscheiden op basis van hun fingerprints ? (CorrelatiecoĆ«fficienten of PCA)
14
Onderscheid Chinese kruiden
Onderscheid van de Chinese kruiden Rhizoma Chuanxiong en Rhizoma Ligustici a.d.h.v. VINGERAFDRUK ANALYSE Vragen / info : Goedele Alaerts Bureau G 037 Tel 02/
15
Experimenteel design in methode optimalisatie
Bieke Dejaegher
16
Experimenteel design Experimenteel design
set-up waarbij de onderzochte factoren tegelijkertijd gevariĆ«erd worden ļ³ factoren Ć©Ć©n voor Ć©Ć©n variĆ«ren Exp F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 1 -1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
17
Experimenteel design Experimenteel design In optimalisatie
set-up waarbij de onderzochte factoren tegelijkertijd gevariĆ«erd worden ļ³ factoren Ć©Ć©n voor Ć©Ć©n variĆ«ren In optimalisatie Ā«Ā screeningĀ Ā» ļØ factoren met grootste invloed of effect op de onderzochte respons(en) bepalen belangrijkste factoren verder onderzoeken mbv Ā«Ā response surface designsĀ Ā» Modelleren van de respons als functie van de factoren Voorbeelden: three-level full factorial designs, central composite designs, Box-Behnken designs, Doehlert designs, uniform designs
18
Doel Verschillende Ā«Ā response surface designsĀ Ā» in optimalisatie vergelijken, welke meest geschikt? 3 factoren ļØ verschillend aantal experimenten ! Three-level full factorial designs: 33=27 exp. Central composite designs: 23+6+min1= min 15 exp. Box-Behnken designs: 13 exp. Doehlert designs: 13 exp. Uniform designs: 6 exp.
19
Doel Verschillende Ā«Ā response surface designsĀ Ā» in optimalisatie vergelijken, welke meest geschikt? 3 factoren ļØ verschillend aantal experimenten ! Three-level full factorial designs: 33=27 exp. Central composite designs: 23+6+min1= min 15 exp. Box-Behnken designs: 13 exp. Doehlert designs: 13 exp. Uniform designs: 6 exp.
20
Doel Verschillende Ā«Ā response surface designsĀ Ā» in optimalisatie vergelijken, welke meest geschikt? 3 factoren ļØ verschillend aantal experimenten ! Three-level full factorial designs: 33=27 exp. Central composite designs: 23+6+min1= min 15 exp. Box-Behnken designs: 13 exp. Doehlert designs: 13 exp. Uniform designs: 6 exp.
21
Doel Verschillende Ā«Ā response surface designsĀ Ā» in optimalisatie vergelijken, welke meest geschikt? 3 factoren ļØ verschillend aantal experimenten ! Three-level full factorial designs: 33=27 exp. Central composite designs: 23+6+min1= min 15 exp. Box-Behnken designs: 13 exp. Doehlert designs: 13 exp. Uniform designs: 6 exp.
22
Doel Verschillende Ā«Ā response surface designsĀ Ā» in optimalisatie vergelijken, welke meest geschikt? 3 factoren ļØ verschillend aantal experimenten ! Three-level full factorial designs: 33=27 exp. Central composite designs: 23+6+min1= min 15 exp. Box-Behnken designs: 13 exp. Doehlert designs: 13 exp. Uniform designs: 6 exp.
23
Doel Verschillende Ā«Ā response surface designsĀ Ā» in optimalisatie vergelijken Gebruikte toepassing? Optimalisatie scheiding HPLC/CE Optimalisatie derivatisatiereactie Invloed van ā aantal exp ? Welk optimum wordt voorspeld uit elk design? Welke voorspelde optima leveren praktisch ook goede resultaten op? Vergelijken voorspelde waarde met experimentele waarde bij gevonden optima
24
Optimisation of CE separation methods for viral compounds
Iulia Oita
25
Who? small, Picornaviridae Model organisms : readily available,
easy to manipulate, quick breeder The picornaviruses, and especially the poliovirus, are at the basis of modern molecular virology which emerged in 1949 when Enders and co-workers succeeded to breed a virus in vitro. Since then the picornavirus research was involved in several milestones, not only in virology, but also in molecular biology. We can mention for instance the description of RNA-dependent RNA polymerase and the cap-independent translation. The first animal virus of which the genome was completely elucidated was the poliovirus, which is also the first virus that could be grown in a cell-free medium. Poliovirus - about 50 nm Human Rhinovirus - about 30 nm (nanometer = one-billionth of a meter)
26
Polio virus studded with 60 twig-like structures, the receptors.
Why? need to understand the molecular infection mechanisms of picornaviruses ā prevent and treat viral diseases development of new antiviral drugs, more efficient and safer vaccines strong curiosity for viruses, small ālivingā chemical entities not all replication steps can be fully explained or linked application of analytical (separation) techniques is only seldom used in virological research Polio virus studded with 60 twig-like structures, the receptors. Due to newer technologies and intense research, most steps of the replication cycle of picornaviruses in the host cell were elucidated in the last years. Yet, not all replications teps can be fully explained or linked. Separation techniques may add a quantitative approach to virological research. AĀ potential example is the interaction between the ānatural stabilizerā and a picornavirus, which is necessary to stabilize a picornavirus. Theoretically, 60 of these molecules can interact with a virus particle, but how many are needed to stabilize it ?
27
How? Using capillary electrophoresis
characterize complete, intact viruses distinguish serotypes execute fast concentration- and purity determinations of viral preparations Virus peak serotype 14 monitor the interaction between virus and: antiviral agents biological molecules Large macromolecular structures, viruses, organelles, and even intact bacterial and eukaryotic cells in free solution, can be separated by CE in a short period of time. Virus peak serotype 2 detect viral structural changes and separate viral particles Electropherograms of two Human Rhinovirus serotypes
28
Practical Optimize CE separation method for virus and/or virus components using experimental design Buffer Voltage Temperature Detection Validate the optimized method
29
Ontwikkelen van onzuiverheids-profielen m. b. v
Ontwikkelen van onzuiverheids-profielen m.b.v. orthogonale chromatografische systemen Melanie Dumarey
30
Onzuiverheidsprofielen
ICH-richtlijn Alle componenten aanwezig als onzuiverheid in een farmaceutische stof in een hoeveelheid die bepaalde grenzen overschrijdt moeten geĆÆdentificeerd en/of gekwantificeerd worden. Waarom? PatiĆ«nt beschermen tegen ongewenste neveneffecten. Voorbeeld Salicylzuur in aspirine.
31
Ontwikkelen onzuiverheidsprofielen
Complex analytisch probleem: Slechts kleine hoeveelheden aanwezig. Bij- of degradatieproducten gelijkaardige structuur als hoofdbestanddeel. Onzuiverheden zijn ongekend (structuur en aantal). Oplossing: gebruik van orthogonale chromatografische systemen.
32
Strategie 1) Screening op een set van orthogonale chromatografische systemen (ā SF, pH, OM) Kans dat alle onzuiverheden gevonden worden groter. Beste chromatografisch systeem kan weerhouden worden voor verdere optimalisatie. 2) SequentiĆ«le optimalisatie pH Organische modifier Temperatuur en gradiĆ«nthelling
33
Doel Stap 1: pH optimalisatie Stap 2: OM optimalisatie
Hoe optimale pH voor geselecteerd systeem voorspellen? Stap 2: OM optimalisatie Hoe optimale ratioās aan organische modifiers bepalen m.b.v. de Snyderās solventendriehoek? 100% MeOH 1 8 4 5 7 9 10 100% ACN 100% THF 2 6 3
34
Praktisch 32 ā RPLC systemen (2 orthogonale SF bij 16 ā organische samenstellingen). Injectie mengsel representatief voor onzuiverheidsprofiel. Optimale samenstelling van de organische fase (in MF) voorspellen a.d.h.v. 7 tot 10 experimentenāgelijkaardige resultaten? Welke benadering geeft beste resultaat?
35
Applicatie-ontwikkeling in (pressurized) Capillaire Electrochromatografie
Indiana Tanret
36
Techniek: pCEC HPLC Miniaturisatie ļ CLC: capillair CE
CEC = combinatie HPLC + CE pCEC = combinatie CLC + CE
37
Praktisch SF in capillaire kolom: monolieten EOF Pomp Je leert hoe
gemaakt worden
38
Doel Applicatie-ontwikkeling
Transfereren van een bestaande HPLC-applicatie naar (p-)CEC of Ontwikkelen van een farmaceutische applicatie op een monolitische SF in p-CEC en/of CEC Je ontwikkelt een strategie, voert ze uit en je verwerkt je resultaten
39
Praktisch Farmaceutische applicatie: bv. Kolommen:
Kwantitatieve analyses van geneesmiddelen in tabletten/plasma Analyse van een geneesmiddel en zijn onzuiverheden/ afbraakproducten Scheiding van biopolymeren Analyse van pesticiden ... Kolommen: monolieten Eventueel optimalisatiestappen doorvoeren
40
Praktisch HPLC Voordelen: ā efficientie? ā selectiviteit? ā resolutie?
snellere runs? ... (p-)CEC
41
Scheiden van Chirale Geneesmiddelen door middel van HPLC
Hasret Ates
42
OVERZICHT Wat is chiraliteit? Belang? Thesisvoorstel
48
CHIRALITEIT Centraal C-atoom 4 verschillende substituenten
Spiegelbeelden niet identiek ļ Enantiomeren!
49
BELANG Verschillend gedrag van enantiomeren in chirale media Gevolg
Minder werking Geen werking Antagonistische werking Toxische werking
50
THESISVOORSTEL Wetgeving FDA en EMEA Gebruikte methode
Distomeer als onzuiverheid in eutomeer Scheiden racemische mengsels Gebruikte methode HPLC met polysaccharide gebaseerde SF
51
THESISVOORSTEL Toepasbaarheid van bestaande strategieƫn controleren
Nieuwe kolommen implementeerbaar? Nieuwe strategieƫn definiƫren indien nodig
52
Opstellen van chirale scheidingsstrategieƫn met behulp van capillaire electroforese
Debby Mangelings
53
Implicaties van chiraliteit
Chiraliteit: het bestaan van twee of meerdere vormen -enantiomeren- van een asymmetrische molecule die spiegelbeeld zijn van elkaar. Enantiomeren: dikwijls een verschillende activiteit in het lichaam (SoftenonĀ® ) Best een geneesmiddel ontwikkelen dat enkel het actieve enantiomeer (eutomeer) bevat Industrie ontwikkelt meestal racematen, achteraf scheiden ļ scheidingsstrategiĆ«en zijn heel nuttig
54
Capillaire electroforese
EOF
55
Capillaire electroforese
- Migratie van de stoffen onder invloed van een electrisch veld (electroforetische migratie) - Drijvende kracht = EOF - Weinig consumptie van staal en buffer tijdens de analyse ļ milieuvriendelijk - Meestal: waterige buffers - Maar: weinig toepassingen voor slecht oplosbare stoffen wegens precipitatieproblemen in H2O CE in niet-waterig milieu
56
Chirale scheidingen met CE
Gebruik van chirale selectoren in de buffer om enantioselectiviteit te bekomen Voorbeeld: cyclodextrines
57
Project - Doel - Evalueren van CE in niet-waterig milieu als chirale scheidingstechniek - Kan een generische scheidingsstragie gedefinieerd worden m.b.v deze techniek? - Opstellen van de strategie en evaluatie
58
Bedankt voor jullie aandacht !!
OVERZICHT op ļ Thesis proposals (linker kolom)
Verwante presentaties
© 2024 SlidePlayer.nl Inc.
All rights reserved.