VUmc Basispresentatie René Vos 14, januari 2016

Slides:



Advertisements
Verwante presentaties
ELISA in de klas Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Infectieziekten opsporen Materiaal VIB.
Advertisements

Verplichte practica natuurwetenschappen
Laboratorium diagnostiek van cystine dr. Leo A. J. Kluijtmans Lab
Demo-sessie practicum Bromatologie: Totaal stikstofgehalte
-Glucuronidase (GUS)
Tellen en differentieren van WBC in liquor met de LH 750
Thermodynamica.
Tevredenheidsonderzoek
2. Hoe zuur is azijn? 2.1 Wat is azijn?
Maillard reactie Voorbeelden van Maillard reacties:
H16. Berekeningen aan zuren en basen
Influenza A(H1N1v) en IZORE Diagnostiek en ondersteuning
Prepareren van niet-gynaecologische monsters
Instrumentele Analyse
Temperatuur en volume Uitzetten of krimpen
5 VWO Hst 8 – zuren en basen.
Welke van onderstaande keuzemogelijkheden is geen stofeigenschap?
Berekeningen aan redoxtitraties
Verstoring van het chemisch evenwicht
Alcoholbepalingen Door: Roy Fremouw.
Eigenschappen buffer pH blijft nagenoeg constant bij:
Stoffen en hun eigenschappen
Massaweging in analytische laboratoria
KULeuven: fermentatie van hydrolysaat
Eiwitzuivering 4 Een praktijkvoorbeeld Specifieke en totale activiteit
BacT/ALERT® Bloedkweek afname
Project de tuintjes Loes de Reus.
Overzicht scheidingsmethoden
WINA.
WINA.
Bloedonderzoek.
Chemisch rekenen voor oplossingen
Verdunningen berekenen
Chemisch rekenen Hfst 3.4 t/m 3.7. Een chemische reactie verloopt vaak niet voor 100% De opbrengst (de Yield = de hoeveelheid product(en) is dan lager.
Toepassingen van evenwichten
Wet van Lambert en Beer.
Molariteit Molariteit concentratie van stof X [X] = Eenheid molair M
Valkuilen bij laboratorium onderzoek
Practicum titreren.
1 Casus 2 Kleurstoffen in voeding Inleiding Wat is de functie: 1)Het product aantrekkelijker maken. 2)De oorspronkelijke kleur teruggeven.
Bloedonderzoek.
Scheikunde theorie klas 1
Rekenen met concentratie
Maak je niet dik: Verdunnen
V ALIDATIE VAN DE AUTOCLAAF SMI 136 X 6 M ETHODEVALIDATIE VAN DE SELECTIVITEIT VAN VITAMINE B1 EN C IN D AVITAMON J UNIOR 1-3 SIROOP Airi Cluyse.
MAIZENKOEKJES TUTORIAL Chevaila Schenkers. Om te beginnen heb je nodig: 125 gr Blue Band bakboter 125 gr witte basterd suiker 1 ei 300 gr maïzena Vanille.
Optimalisatie van enzymatische testen voor de analyse van sulfiet, L-ascorbinezuur en glucose in voedsel Kürt Bultinck Biotox, Jabbeke.
Bepaling van ethanol in biologische monsters met behulp van statische headspace en gaschromatografie met vlamionisatie detector Jan De Rycke.
1 Maak je niet dik: Verdunnen Opzetje door Ruud van Iterson Voor herbies.nl.
Daphne Seys Buitenlandse stage gevolgt aan Dublin city university
Metabolisatiestudie van methyldienolone en methyltrienolone aan de hand van het in vivo chimeer uPA+/+-SCID muismodel en in vitro humane lever microsomen.
Chemie Overal , hoofdstuk 2.5
Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen
Zuur base titratie Methode om concentratie bepalingen te doen Nodig
HACCP.
Bloed, bloedafname en bloedonderzoek
Stralingsbescherming deskundigheidsniveau 5
Validatiegegevens compendiummethode chloor bij hoge CO2-gehaltes
Proefexamen uitwerking open vragen Frits Pleiter
Test van de compendiummethode voor Cl2 in aanwezigheid van CO2
PH en EC..
De Kookproef Doel, Bepalen van: Alcohol percentage van de wijn
voorbeeld verband pH – zuurgetal
Bloed Bloedgroepen Bloedstolling D17vab
Zuur base titratie Concentratie bepaling Onbekende oplossing zuur
Hoofdstuk 2 Wat gaan we doen? Terugblik Doel van vandaag Nieuwe stof
Bloed Bloedgroepen Bloedstolling D17vab
Verkorte validatie van Anti-arrhythmica op de LC-MS/MS
Validatiegegevens compendiummethode chloor bij hoge CO2-gehaltes
Test van de compendiummethode voor Cl2 in aanwezigheid van CO2
Transcript van de presentatie:

VUmc Basispresentatie René Vos 14, januari 2016 Analyse thiopurines René Vos 14, januari 2016

VUmc Basispresentatie Inleiding Monsterstabiliteit Monstervoorbewerking Dervieux vs Lennard Analyse

Stabiliteit

Stabiliteit Monsters Kamertemperatuur Koelkast Gewassen ery’s - 20°C - 80°C

stabiliteit thiopurinemetabolieten in bloedmonsters

stabiliteit thiopurinemetabolieten in erytrocyten

Stabiliteit (verzending)

Stabiliteit (verzending)

Stabiliteit (verzending) Verzendenvelop niet kouder dan 7°en binnen 18 uur weer op kamertemperatuur. Tempexverzenddoos Minimum temperatuur -4°C. en na 18 uur weer op kamertemperatuur. Grote doos Het beste temperatuurprofiel. De monsters gedurende 47 uur koeler dan 8°C.

Monstervoorbewerking

Monstervoorbewerking Scheiden erythrocyten (wassen) centrifugeren bij 3000 rpm plasma en leucocyten afpipetteren PBS buffer toevoegen tot oorspronkelijk volume Na mengen nogmaals centrifugeren Bufferlaag afpipetteren Overgebleven ery’s 1:1 verdunnen met PBS buffer Telling erythrocyten Op Klinisch Chemisch Laboratorium

Monstervoorbewerking Erycount rond de 4 x 1012 RBC/L Opslag bij -20°C Analyse binnen 3 dagen

Methodes

Methodes

Dervieux vs Lennard 6-TG

Dervieux vs Lennard 6-MMP VUmc Basispresentatie Dervieux vs Lennard 6-MMP

Analyse

Analyse (standaarden en QC’s) Stockoplossingen 6-thioguanine en 6-mercaptopurine 10 mg 6-TG oplossen in 4ml 0,1N NaOH en aanvullen tot 100ml met aqua dest. 10 mg 6-MMP oplossen in 4ml 0,1N NaOH onder ultrasonen, 10ml 1M HCl toevoegen en aanvullen tot 100ml met aqua dest.

Analyse (standaarden en QC’s) Breng 5ml blanco ery’s in een maatkolf van 10ml Voeg stockoplossing 6-TG en 6-MMP toe Vul aan met PBS buffer

Analyse (standaarden en QC’s) Stockoplossingen worden niet bewaard Opslag standaarden en QC’s bij -80 Houdbaarheid 3 maanden

Analyse Pipetteer in verschillende cupjes met rondbodem: 250 μL van de standaarden, patiënten materiaal en controles Voeg toe: 20 μL Interne Standaard 6-TG 20 μL DTT oplossing 1,1 mol/L (vers) 45 μL Perchloorzuur 70-72% en vortex direct even Vervolgens: 1,5 minuten vortexen 15 minuten centrifugeren op 14.000 RPM breng de heldere vloeistof over in een schroefbuis met dop incubeer 60 minuten bij 100° C in het thermoblok Laat afkoelen en breng over in autosampler vials

Analyse

Analyse Pipetteer in verschillende cupjes met rondbodem: 250 μL van de standaarden, patiënten materiaal en controles Voeg toe: 20 μL Interne Standaard 6-TG 20 μL DTT oplossing 1,1 mol/L (vers) 45 μL Perchloorzuur 70-72% en vortex direct even Vervolgens: 1,5 minuten vortexen 15 minuten centrifugeren op 14.000 RPM breng de heldere vloeistof over in een schroefbuis met dop incubeer 60 minuten bij 100°C in het thermoblok Laat afkoelen en breng over in autosampler vials

Analyse HPLC instellingen Waters Symmetry C18; 3.9 x 150 mm; 5μm + guard kolom MF: 0,01M ammoniumacetaat pH 5,5 : Acetonitril (95:5) Flow = 1,2 ml/min Temperatuur = 20°

Analyse Chromatogram 5-BU 280nm 6-MMP 304nm 6-TG 341nm DTT

Vragen