Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats: Howest Brugge Stagementor: Anneleen Cottyn

Inhoudstafel Inleiding Ontstaan van kanker Ontstaan en voorkomen colorectale kanker Risicostoffen Beschermende stoffen Probleemstelling Methoden Maagdarmsimulatie Cytotoxiciteitstesten Resultaten MTS en NR Resultaten immunofluorescentie Resultaten FACS Besluit Toekomst

Ontstaan van kanker DNA-schade Inleiding

Ontstaan en voorkomen colorectale kanker Colon en rectum 3 e meest voorkomend Geen duidelijke oorzaken Erfelijk Risicofactoren Obesitas + te weinig beweging Chronische inflammatie Te lange gastro- intestinale transsittijd Risicostoffen in voeding Risicofactoren Inleiding

Risicostoffen Zout Nitraat/nitriet Lichaam: nitriet  nitraat  ureum Indien niet  nitriet bindt aan hemoglobine  zuurstoftekort  Ontstaan carcinogene nitrosoverbindingen Heemijzer Bevordert vorming carcinogene nitrosoverbindingen Teveel aan ijzer  vrije radicalen + ontstekingsfactoren activeren in darm Vet, suiker,… Inleiding

Beschermende stoffen Groenten en fruit Indirect effect: vitamines, mineralen, antioxidanten & voedingsvezels verkleinen kans op overgewicht Voedingsvezels o niet verteerbaar; gefermenteerd door bacteriën Calcium o Verminderde proliferatie o Normale differentiatie o Bindt aan galzuren- en vrije vetzuren Antioxidanten Neutraliseren vrije radicalen Vitamines, … Inleiding

Probleemstelling Rapport WCRF uit 2007: consumeren van rood en verwerkt vlees verhoogt risico op ontstaan colorectale kanker.  nog geen wetenschappelijke bewijzen  oorzaken?

Maagdarmsimulatie Methoden

Cytotoxiciteitstesten o CaCO 2 : 96-well plaat Methoden cytotoxiciteitMTS Tetrazolium (geel)  formazan (bruin) NR Opname door levende cellen Necrose/ apoptose IF Apoptose (groen) & necrose (rood ) FACS Lichtverstrooiing & emissielicht

MTS en NR Vlees Overleving vlees > overleving controlesap Resultaten

MTS en NR Additieven: Overleving vlees > overleving zout Methoden

MTS en NR Overleving vlees > overleving zout + nitriet Resultaten

Immunofluorescentie Staal colon 3 uur; verdunning 1/8; 2% zout Resultaten

FACS Enkel kleuring met Annexine-V-FLUOS = enkel aanduiding apoptose Veel negatief Resultaten

Besluit Vivaspin beste voorbehandelingsmethode MTS beter dan NR Overleving vlees > overleving controlesap  sap nog te toxisch? Zout en zout + nitriet minder goede overleving dan vlees FACS en IF: preliminaire experimenten

Toekomst MTS beter dan NR  enkel met MTS werken Andere voedingsmiddelen onderzoeken Invloed darmbacteriën? Resultaten representatief in vivo ?

Optimalisatie van een in vitro model binnen het onderzoek naar de toxiciteit van voedingsstoffen op darmepitheel Student: Lieselotte Maes Stageplaats: Howest Brugge Stagementor: Anneleen Cottyn