SDS-PAGE met IPTG en insert in juiste orientatie : A-c en B-b

Presentatie over: "SDS-PAGE met IPTG en insert in juiste orientatie : A-c en B-b"— Transcript van de presentatie:

1

2 SDS-PAGE met IPTG en insert in juiste orientatie : A-c en B-b
geen IPTG en insert in juiste orientatie : A-d en B-c met IPTG en insert in omgekeerde orientatie : A-e en B-d geen IPTG en insert in omgekeerde orientatie : A-f en B-e

3 Pribnow box (-10) T89 A99 T50 A65 A65 T100 s70 bindingsplaats (-35) T85 T83 G81 A61 C69 A52

4

5 “Relatieve” sterkte van promotoren :

6

7

8

9 123123123 de cijfers in de figuur geven aan met welk
(in sequence register) de cijfers in de figuur geven aan met welk leesraam in ORFs de curve overeenkomt ? de vorm van de curve geeft aan vanaf welk nucleotide (m.a.w register) er geteld is. (zie aanduiding boven de figuur) register versus ORF

10

11

12

13

14 Random inserties in de ScaI plaats van het cat gen

15

16

17

18

19

20

21

22 pMAL vectoren : ColE1 ori ; M13 ori ; Ptac ; rrnB terminatoren ; lacIq ; bla Fusieconstruct : malE - DDDDDDDDDD - IEGR - MCS - lacZa pMAL-c2 : malE signaalpeptide sequentie gedeleteerd pMAL-p2 : malE signaalpeptide sequentie : secretie naar het periplasma fusie in XmnI : exacte koppeling van doelwiteiwit aan de factor Xa sequentie 10 Asp residus (D) scheiden de twee fusiegedeelten insertie in EcoRI is identisch (qua leesraam) als in lgt11 (lacZ) factor Xa I - E - G - R * XmnI nnn nnn nGA Ann nnT TCn nnn ATC-GAG-GGA-AGG-ATT-TCA-GAA-TTC- EcoRI

23

24