RIAM, an Ena/VASP and Profilin Ligand, Interacts with Rap1-GTP and Mediates Rap1-induced Adhesion Esther M. Lafuente, André A.F.L. van Puijenbroek, Mattias Krause, Christopher V. Carman, Gordon J. Freeman, Alla Berezovskaya, Erica Constantine, Timothy A. Springer, Frank B. Gertler and Vassiliki A. Boussiotis Developmental Cell, vol , October 2004

Introductie Rap1 is GTPase uit Ras superfamilie Rap 1 induceert integrine-gemedieerde celadhesie en veranderingen in actine cytoskelet Mechanismen onbekend Dit artikel: RIAM geïdentificeerd als eiwit dat met Rap1-GTP interacteert

RIAM: Interactie met Rap-1 GTP Interactie met regulatoren actine cytoskelet Inductie celspreiding en vorming lamellipodia Inductie integrine-gemedieerde celadhesie Inductie Rap1 gemedieerde cel–ECM adhesie Localisatie Rap1 aan plasma membraan

Interactie met Rap1-GTP in vitro en in vivo

Celspreiding

Interactie met regulatoren actine-cytoskelet (1) Profiline VASP

Interactie met regulatoren actine-cytoskelet (2) RIAM vormt link tussen Rap1 en Profiline

RIAM is nodig voor localisatie Rap1-GTP op het plasma membraan RAP1F-actineOverlay Control KD RIAM KD

RIAM induceert celspreiding en vorming lamellipodia F-actine RIAM Overlap

RIAM reguleert F-actine:G-actine verhouding

Celadhesie

RIAM induceert ß1- en ß2-integrine gemedieerde celadhesie

RIAM-KD verhindert Rap1-GTP gemedieerde celadhesie

RIAM is een downstream effector van Rap1-GTP “data not shown”

RIAM bindt Ena/VASP eiwitten d.m.v. EVH1 bindingsmotieven EVH1 motief op RIAM geblokkeerd RIAM geïnduceerde adhesie onveranderd “data not shown” Binding Ena/VASP-RIAM niet vereist voor RIAM-geïnduceerde celadhesie

RIAM, AF-6, RAPL (1) Alledrie mogelijke effectoren van Rap1-GTP: RIAM: cel-ECM adhesie + celspreiding AF-6: cel-cel adhesie (celjuncties) RAPL: B cel-T cel adhesie  immunologische synaps + cel-ECM adhesie

AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2)

Profiline AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL

RIAM, AF-6, RAPL (2) Profiline AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Ena/VASP

RIAM, AF-6, RAPL (2) AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet

RIAM, AF-6, RAPL (2) AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet β1- β2-integrines

RIAM, AF-6, RAPL (2) Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Fibronectine / ICAM- Adhesie β1- β2-integrines

RIAM, AF-6, RAPL (2) Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Fibronectine / ICAM- Adhesie Spa1 β1- β2-integrines

Discussie (1) Meer bewijs dat RIAM downstream effector Rap1-GTP is *Spa1 en RIAM aanwezig  nog steeds adhesie Kan RIAM zonder EVH1-domeinen aan Ena/VASP binden? *EVH1-domein op RIAM Meer onderzoek doen naar eventueel verband RIAM en Ena/VASP bij celspreiding

Discussie (2) Behoren de drie eiwitten tot dezelfde pathway? Hoe kan RIAM actieve conformatie van β1 en β2 integrines induceren? Hoe zorgt RIAM voor localisatie van Rap1 aan het plasma membraan

Vervolgonderzoek (1) Is er een verband tussen RIAM en RAPL bij de vorming van een immunologische synaps (IS)?

Vervolgonderzoek (2) - Is RIAM aanwezig bij de IS? - Fluorescentiemicroscopie - Bindt RIAM aan RAPL? - Immunoprecipitatie - Wat is het effect van RIAM op de IS? - RIAM overexpressie / RIAM-KD - idem in afwezigheid / overexpressie van RAPL

Vragen?