Cindy Lecluyse Promotor: Bart Quartier Stagementoren: Soraya França Sarah Van Beneden Stagegever: Prof. dr. ir. Monica Höfte

Inhoudsopgave  Verticillium  In vitro pathogeniciteit  In vivo pathogeniciteit + interactie  Detectie Species-Specifieke PCR Tellen van aantal kiemkrachtige microscleroten in grond  Besluit

Verticillium  Veroorzaakt vasculaire aandoeningen  De belangrijkste Verticillium spp. in dit werk: V. longisporum= plantpathogene schimmel die de asymmetrische vergeling, verwelking en dwerggroei bij bloemkool veroorzaakt. V. tricorpus = zwakke pathogeen, mogelijk biologische bestrijder van V. longisporum. vorming microscleroten = overlevingsstructuren die tot 15 jaar in de grond kunnen overleven

Verticillium – Levenscyclus

Verticillium in België  Nog geen effectieve bestrijding tegen Verticillium verwelking  In West-Vlaanderen: sporadische aantasting Voorgaande veldexperimenten: naast V. longisporum ook aanwezigheid van V. tricorpus. In velden met aanwezigheid van beide species  geen aantasting!  In Klein-Brabant: veel aantasting, nauwelijks aanwezigheid van V. tricorpus DOEL: Interactie tussen V. tricorpus en V. longisporum bestuderen  V. tricorpus mogelijke biologische bestrijder van V. longisporum

In vitro pathogeniciteit  Gamborg B5 Medium in cultuurbuizen  Inoculatie van bloemkoolras ‘Clapton’ met V. longisporum en V. tricorpus  Geen uiterlijke symptomen zichtbaar  Vers gewicht van de in vitro planten (‘Clapton’) Groeistimulatie door V. tricorpus

In vitro pathogeniciteit  Worteloppervlak ‘Clapton’ bedekt door microscleroten (%) Meer microscleroten bij behandeling met V. tricorpus → resistentie reactie plant? V. longisporum V. tricorpus

In vitro pathogeniciteit  Microscleroten binnenin de wortelcortex van plant ‘Clapton’ geïnoculeerd met V. tricorpus

In vivo pathogeniciteit + interactie  Bloemkolen van het ras ‘Cornell’  Grond bevloeiingsmethode, inoculatie met sporensuspensie  4 behandelingen: Nummer behandelingEerste behandelingTweede behandeling (1 week later) 1Water 2 V. longisporum 3WaterV. tricorpus 4 V. longisporum

In vivo pathogeniciteit + interactie  Na 4 weken: eerste symptomen van Verticillium zichtbaar

In vivo pathogeniciteit + interactie  Eindevaluatie: zwartverkleuring van de xyleemvaten (score 0  3) Verdeling van de scores: Combinatie hier geen effect op bescherming van de plant.

Detectie van Verticillium in grondstalen  Telling van aantal microscleroten op MSEA (Modified Soil Extract Agar) Nadelen: ○ Tijdrovend ○ Soms moeilijk onderscheid tussen microscleroten van verschillende species  Species-specifieke PCR biedt mogelijk een oplossing Voordelen: ○ Snel ○ Nauwkeurig

Species-specifieke PCR  Optimalisatie van de species-specifieke PCR van V. longisporum en V. tricorpus.  Snel en nauwkeurig opsporen van deze species in grondstalen Eerste stap van optimalisatie is afgerond. L 1 2 3

Bepaling aantal kiemkrachtige microscleroten in grondstalen  Bevestiging van voorgaande tellingen  Grondstalen Klein-Brabant West-Vlaanderen  Drogen, natte zeving, uitplaten op MSEA  Na 4 weken: telling Microscleroten V. longisporum Microscleroten V. tricorpus 200 µm

Bepaling aantal kiemkrachtige microscleroten in grondstalen  West-Vlaanderen: praktisch in alle grondstalen aanwezigheid van V. tricorpus.  Klein-Brabant: slechts één grondstaal met aanwezigheid van V. tricorpus.

BESLUIT  In vitro pathogeniciteit: ○ V. tricorpus groeistimulatie in ‘Clapton’, ○ Meer microscleroten bij behandeling met V. tricorpus → resistentie reactie plant?  In vivo pathogeniciteit + interactie: ○ V. tricorpus kon de plant hier niet beschermen tegen V. longisporum  Species-specifieke PCR: ○ PCR van V. longisporum en V. tricorpus geoptimaliseerd.  Bepaling aantal microscleroten in grondstalen: ○ In West-Vlaanderen: aanwezigheid van V. tricorpus in praktisch alle grondstalen ○ In Klein-Brabant: slechts in één grondstaal aanwezigheid van V. tricorpus

Bedankt voor jullie aandacht!  Stagementoren: Soraya França Sarah Van Beneden  Promotor: Bart Quartier  Stagegever:Prof. dr. ir. Monica Höfte  Het lectorencorps van BLT

Vragen?

Cindy Lecluyse Promotor: Bart Quartier Stagementoren: Soraya França Sarah Van Beneden Stagegever: Prof. dr. ir. Monica Höfte