Kinetica Opgaven ter voorbereiding van het practicum en bespreking van het practicum
Opgaven ter voorbereiding van het practicum
Bepalen van de initiële snelheid. met p als stoechiometrisch coëfficiënt
De Michaelis Menton vergelijking omzetten tot de wiskundige vorm y=ax+b Door substitutie waarbij en
Bespreking van het practicum
Het doel en de beschrijving Kinetica van een enzymatische reactie volgen De kinetica bepalen van een reactie Kennismaking met spectrometer
Reactievergelijking
Informatie over de spectrometer De werking van de spectrometer
USB2000 Eerste spiegel Tweede spiegel Optische detector Digitale detector Lichtbron Rooster
Opstelling van de proef Computer Cuvette Spectrometer Pipet
Opstelling van de proef Pipet
Opstelling van de proef Computer Cuvette Spectrometer Pipet
Werkwijze Cuvette: 2.0mL buffer (pH=6.9)+0.5mL enzymoplossing In spectrometer referentie + 0.5mL catechol met bepaalde concentratie Ocean Optics meting starten en opslaan 4 keer overdoen Catechol-oplossing concentratie catechol in cuvette Exp. 1 0,50 mL (0,012M) 0,002M Exp. 2 0,50 mL (0,006M) 0,001M Exp. 3 0,50 mL (0,003M) 0,0005M Exp. 4 0,50 mL (0,0015M) 0,00025M Exp. 5 0,50 mL (0,00075M) 0,000125M
5 grafieken van de 5 experimenten : absorbantie in functie van de tijd
Grafiek van de 5 functies met hun eerste 5 punten
1/helling in functie van 1/concentratie Exp. Conc. Catechol snelheid (=helling) 1/conc 1/snelheid 1 0,002 0,0268 500 37,31343 2 0,001 0,0158 1000 63,29114 3 0,0005 0,0097 2000 103,0928 4 0,00025 0,0052 4000 192,3077 5 0,000125 0,0027 8000 370,3704
Berekeningen van en op basis van de grafieken: absorbantie in functie van de tijd is eenvoudig af te leiden uit de grafiek is het snijpunt van de y-as kunnen we dan ook makkelijk bepalen
Het verband tussen absorbantie en concentratie met Uit exp. 1: reactie die het snelst opgaat A= 1.458 OD c = 0.002 M (beginconcentratie in cuvette) d= 1 cm (dikte van cuvette) Dan
Het verband tussen absorbantie en concentratie 1.458
Het verband tussen absorbantie en concentratie met Uit exp. 1: reactie die het snelst opgaat A= 1.458 OD c = 0.002 M (beginconcentratie in cuvette) d= 1 cm (dikte van cuvette) Dan
Berekeningen van en op basis van concentratie in functie van de tijd van concentratie berekenen via de van absorbantie
blijft onveranderlijk
Samenvatting berekeningen is de die gedefinieerd is in de chemie blijft hetzelfde
Conclusie Via de spectrometer kunnen we de kinetica van de enzymatische reactie volgen en zijn berekende constanten en zijn veranderlijken vergelijking van functie opstellen via Michaelis Menton vergelijking
1ste kan biologie