RIAM, an Ena/VASP and Profilin Ligand, Interacts with Rap1-GTP and Mediates Rap1-induced Adhesion Esther M. Lafuente, André A.F.L. van Puijenbroek, Mattias.

Presentatie over: "RIAM, an Ena/VASP and Profilin Ligand, Interacts with Rap1-GTP and Mediates Rap1-induced Adhesion Esther M. Lafuente, André A.F.L. van Puijenbroek, Mattias."— Transcript van de presentatie:

1 RIAM, an Ena/VASP and Profilin Ligand, Interacts with Rap1-GTP and Mediates Rap1-induced Adhesion Esther M. Lafuente, André A.F.L. van Puijenbroek, Mattias Krause, Christopher V. Carman, Gordon J. Freeman, Alla Berezovskaya, Erica Constantine, Timothy A. Springer, Frank B. Gertler and Vassiliki A. Boussiotis Developmental Cell, vol.7 585-595, October 2004

2 Introductie Rap1 is GTPase uit Ras superfamilie Rap 1 induceert integrine-gemedieerde celadhesie en veranderingen in actine cytoskelet Mechanismen onbekend Dit artikel: RIAM geïdentificeerd als eiwit dat met Rap1-GTP interacteert

3 RIAM: Interactie met Rap-1 GTP Interactie met regulatoren actine cytoskelet Inductie celspreiding en vorming lamellipodia Inductie integrine-gemedieerde celadhesie Inductie Rap1 gemedieerde cel–ECM adhesie Localisatie Rap1 aan plasma membraan

4 Interactie met Rap1-GTP in vitro en in vivo

5 Celspreiding

6 Interactie met regulatoren actine-cytoskelet (1) Profiline VASP

7 Interactie met regulatoren actine-cytoskelet (2) RIAM vormt link tussen Rap1 en Profiline

8 RIAM is nodig voor localisatie Rap1-GTP op het plasma membraan RAP1F-actineOverlay Control KD RIAM KD

9 RIAM induceert celspreiding en vorming lamellipodia F-actine RIAM Overlap

10 RIAM reguleert F-actine:G-actine verhouding

11 Celadhesie

12 RIAM induceert ß1- en ß2-integrine gemedieerde celadhesie

13 RIAM-KD verhindert Rap1-GTP gemedieerde celadhesie

14 RIAM is een downstream effector van Rap1-GTP “data not shown”

15 RIAM bindt Ena/VASP eiwitten d.m.v. EVH1 bindingsmotieven EVH1 motief op RIAM geblokkeerd RIAM geïnduceerde adhesie onveranderd “data not shown” Binding Ena/VASP-RIAM niet vereist voor RIAM-geïnduceerde celadhesie

16 RIAM, AF-6, RAPL (1) Alledrie mogelijke effectoren van Rap1-GTP: RIAM: cel-ECM adhesie + celspreiding AF-6: cel-cel adhesie (celjuncties) RAPL: B cel-T cel adhesie  immunologische synaps + cel-ECM adhesie

17 AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL RIAM, AF-6, RAPL (2)

18 Profiline AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL

19 RIAM, AF-6, RAPL (2) Profiline AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Ena/VASP

20 RIAM, AF-6, RAPL (2) AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet

21 RIAM, AF-6, RAPL (2) AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet β1- β2-integrines

22 RIAM, AF-6, RAPL (2) Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Fibronectine / ICAM- Adhesie β1- β2-integrines

23 RIAM, AF-6, RAPL (2) Ena/VASP Profiline Actine cytoskelet AF-6 Rap1-GTP RIAM RAPL Fibronectine / ICAM- Adhesie Spa1 β1- β2-integrines

24 Discussie (1) Meer bewijs dat RIAM downstream effector Rap1-GTP is *Spa1 en RIAM aanwezig  nog steeds adhesie Kan RIAM zonder EVH1-domeinen aan Ena/VASP binden? *EVH1-domein op RIAM Meer onderzoek doen naar eventueel verband RIAM en Ena/VASP bij celspreiding

25 Discussie (2) Behoren de drie eiwitten tot dezelfde pathway? Hoe kan RIAM actieve conformatie van β1 en β2 integrines induceren? Hoe zorgt RIAM voor localisatie van Rap1 aan het plasma membraan

26 Vervolgonderzoek (1) Is er een verband tussen RIAM en RAPL bij de vorming van een immunologische synaps (IS)?

27 Vervolgonderzoek (2) - Is RIAM aanwezig bij de IS? - Fluorescentiemicroscopie - Bindt RIAM aan RAPL? - Immunoprecipitatie - Wat is het effect van RIAM op de IS? - RIAM overexpressie / RIAM-KD - idem in afwezigheid / overexpressie van RAPL

28 Vragen?