De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

Presentatie titel Rotterdam, 00 januari 2007 Microscopie Campbell H6.1 Reed H28, 29 Rotterdam, augustus 2013, Gebaseerd op Campbell et al (2011) Biology,

Verwante presentaties


Presentatie over: "Presentatie titel Rotterdam, 00 januari 2007 Microscopie Campbell H6.1 Reed H28, 29 Rotterdam, augustus 2013, Gebaseerd op Campbell et al (2011) Biology,"— Transcript van de presentatie:

1 Presentatie titel Rotterdam, 00 januari 2007 Microscopie Campbell H6.1 Reed H28, 29 Rotterdam, augustus 2013, Gebaseerd op Campbell et al (2011) Biology, 9 th edition, Pearson

2 Opbouw van de les Waarom microscopie? Bouw van een helderveld lichtmicroscoop Wat zijn resolutie, contrast en scherptediepte? Contrastversterking door kleuring (algemeen/differentieel), fasecontrast, donkerveld Resolutie en numeriek apertuur Resolutievergroting door kleinere afstand preparaat-objectief, immersieolie, electronenmicroscopie (TEM) 3D door confocale microscopie en SEM

3 De noodzaak van een microscoop

4 Opbouw van de les Bouw van een helderveld lichtmicroscoop

5 Lichtmicroscoop HLO BML Antonie van Leeuwenhoek (1674) Robert Hooke (1667)

6 Lichtmicroscoop HLO BML Resultaten met een replica (TU Eindhoven, groep Prof. Kroesen) : keukenzout kristallen

7 Lichtmicroscoop HLO BML Resultaten met een replica (TU Eindhoven, groep Prof. Kroesen) : doorsnede zonnebloemwortel

8 Opbouw van een microscoop

9 9 Doorvallend licht: helderveld

10 Nat preparaat E.coli HLO BML Weinig Contrast Weinig Resolutie

11 Opbouw van de les Wat zijn resolutie, contrast en scherptediepte?

12 Wat is contrast? HLO BML Hoog contrast, weinig licht passeert het object Laag contrast, veel licht passeert het object

13 Resolutie Resolutie: de mate waarin twee losse punten nog afzonderlijk kunnen worden waargenomen (= oplossend vermogen)

14 scherptediepte 14 pth_of_field

15 Effect door scherptediepte 15 achter midden voor Medlibrary.org/medwiki/ focus_stacking

16 Opbouw van de les Contrastversterking door kleuring (algemeen/differentieel), fasecontrast, donkerveld

17 Contrast versterking in lichtmicroscopie Kleuringen in combinatie met eenvoudige lichtmicroscoop Algemeen (methyleen blauw) Specifiek: organellen (flagel, endosporen) Specifiek: differentieel (gram, zuurvast) Toegepast bij bacterie-, en schimmel-preparaten Fasecontrast microscoop Toegepast bij alle cellen Donkerveld microscoop Toegepast bij kleine bacteriën (mycoplasma) en dunne bacteriën (spirocheten/spirillen) Diafragma bij doorvallend licht iets dichtdraaien (tot 80% van de NA) HLO BML

18 Algemeen: Methyleen blauw HLO BML

19 Differentieel: Gram kleuring Lugol

20 Fasecontrast HLO BML Faseverschillen worden gemanipuleerd tot intensiteit verschillen

21 Fasecontrast/helderveld HLO BML licht fasecontrast Saccharomyces cerevisiae (bakkersgist)

22 Donkerveld HLO BML Er wordt niet gekeken naar doorvallend licht maar naar gereflecteerd licht Dit wordt vooral toegepast bij zeer kleine/dunne bacterien, met name spirillen en spirocheten

23 Donkerveld HLO BML Borrelia burgdorferi (ziekte van Lyme)

24 Fasecontrast/donkerveld HLO BML licht fasecontrast donkerveld Saccharomyces cerevisiae (bakkersgist)

25 Opbouw van de les Resolutie en numeriek apertuur

26 Numerieke apertuur Hoe groter de numeriek apertuur (NA of A n )(formule niet onthouden)... hoe groter de hoek van de lichtstralen die nog worden opgevangen door het objectief... hoe meer lichtstralen worden gebruikt voor het maken van een beeld... hoe scherper het beeld (resolutie) ! N = de brekingsindex v/h medium om de lens (1,0 voor lucht, 1,33 voor water, 1,56 voor olie)brekingsindex Θ = de grootste invalshoek ten opzichte van de normaal (loodrechte door het lensoppervlak)

27 Opbouw van de les Resolutievergroting door kleinere afstand preparaat-objectief, immersieolie, electronenmicroscopie (TEM)

28 Resolutie versterking in lichtmicroscopie Immersie-olie verhoogt brekingsindex Kwaliteit/breedte vd lens vergroot lichtopbrengst Sterke lens geeft brandpuntafstand dichterbij de lens, dus vergroot lichtopbrengst HLO BML

29 Grotere vergroting op zich geeft geen hogere resolutie

30 30

31 31

32 32

33 33

34 Hogere numerieke apertuur (hier: kleinere afstand lens-object) geeft wèl hogere resolutie

35 35

36 36 Welke foto heeft een hogere resolutie?

37 37

38 38

39 Resolutie en golflengte/deeltjesgrootte: electronenbundel geeft hogere resolutie dan licht

40 40

41 Opbouw van een electronen microscoop

42 Lichtmicroscopie / Elektronemicroscopie 42

43 Opbouw van de les 3D door confocale microscopie en SEM

44 Opbouw van een scanning electronen microscoop

45 45

46 Figure 26.2 Examples of images of a similar specimen (the stomatal complex of Commelina communis) obtained using different microscopic techniques: (a) light microscopy (surface view); (b) transmission electron microscopy (transverse section through guard cell pair at mid pore); and (c) scanning electron microscopy (surface view). As an indication of scale, the width of a single guard cell is about 10  m

47 Verschillende microscopietechnieken vereisen een andere fixatie / ‘kleuring’


Download ppt "Presentatie titel Rotterdam, 00 januari 2007 Microscopie Campbell H6.1 Reed H28, 29 Rotterdam, augustus 2013, Gebaseerd op Campbell et al (2011) Biology,"

Verwante presentaties


Ads door Google