De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

Regulation of calcium-sensing receptor by amyloid- beta-42: implications for Alzheimer’s disease 2 ste Master Biomedische Wetenschappen Jabar Zada Freba.

Verwante presentaties


Presentatie over: "Regulation of calcium-sensing receptor by amyloid- beta-42: implications for Alzheimer’s disease 2 ste Master Biomedische Wetenschappen Jabar Zada Freba."— Transcript van de presentatie:

1 Regulation of calcium-sensing receptor by amyloid- beta-42: implications for Alzheimer’s disease 2 ste Master Biomedische Wetenschappen Jabar Zada Freba Academiejaar: 2012 – 2013Promotor: Prof. Dr. K. D’Herde Co-promotor: Dr. A. Diez Fraile 1

2 Overzicht 1.Probleemstelling 2.Hypothese 3.Materiaal en methode 4.Resultaten en discussie 5.Conclusies 2

3 3 1.Probleemstelling De ziekte van Alzheimer  Neurodegeneratief  Microscopisch: tau-eiwit kluwens amyloid-β plaques  Verhoogde secretie van Amyloid-β (Aβ) peptide Vicieuze cirkel

4 4 1.Probleemstelling De pathogenese van Alzheimer  Oorzaak?  Stoornis in calcium homeostase  Calcium-sensing receptor (CaSR)  Amyloid-β een agonist van CaSR  GPCR wijdverspreid in het CZS

5 2. Hypothese  CaSR is betrokken in Aβ42 gemedieerde activatie van astrocyten. 5

6 3. Materialen en methoden Celcultuur NHA = Normale Humane Astrocyten Reagentia Oligomere humane Aβ42 (1-20µM; 6 &12h) CaSR agonist, NPS-R-568 (0,1-10µM; 6&12h) Methoden Transmissie elektronenmicroscopie (TEM) Immunocytochemie F-actine kleuring RT-qPCR 6

7 4. Resultaten 1. Transmissie-electronenmicroscopie NHA cellijn weinig gekend Karakteristatie van NHA subculturen Glycogeen opstapeling Geëlongeerde mitochondriën Cytoplasmatische extensies Gecoate Vesikels en caveolae Gap juncties  Astrocyten

8 4. Resultaten 2. Immunocytochemie Niet-gepermeabiliseerdGepermeabiliseerd CaSR Kern

9 4. Resultaten Controle Aβ42 Hu J, Akama KT, Krafft GA, Chromy BA, Van Eldik LJ (1998). Amyloid-beta peptide activates cultured astrocytes: morphological alterations, cytokine induction and nitric oxide release. Brain research 785: Aβ42-gemedieerde activatie van astrocyten

10 3.1. F-actine kleuring en DAPI 6h amyloïd-β-42 Geen geactiveerde morfologie te zien 4. Resultaten

11 3.2. Evaluatie van iNOS, TNF-α en IL-1β door RT-qPCR Geen detectie van iNOS en TNF-α Lichte upregulatie van IL-1β na 6 h incubatie met 1 µM Aβ42 4. Resultaten Amyloid-beta-42NPS-R-568

12 1.Oligomere vorm van Aβ42?  Negatieve kleuring en TEM 2.GFAP (Glial Fibrillary Acidic protein)-kleuring 4. Resultaten Ahmed M, Davis J, Aucoin D, et al (2007) Structural conversion of neurotoxic amyloid-beta(1-42) oligomers to fibrils. Nat Struct Mol Biol. 17: fibrillair oligomeer 4. Evaluatie van mogelijke valkuilen

13 5. Conclusie  Astrocyten: ultrastructurele kenmerken  CaSR expressie  geen dosis- en tijdsafhankelijke morfologische activatie na incubatie met Aβ42 of NPS-R-568  Geen verhoogde productie van onderzochte pro-inflammatoire moleculen  Aβ42 juist geaggregeerd  GFAP negatief  Ondanks de aanwezigheid van CaSR geen activatie van NHA door Aβ42 of NPS-R-568 waargenemen. Hypothese: Mogelijks hebben de GFAP negatieve astrocyten een verlaagde responsiviteit aan Aβ42.

14 Bedankt voor uw aandacht ! Vragen? 14


Download ppt "Regulation of calcium-sensing receptor by amyloid- beta-42: implications for Alzheimer’s disease 2 ste Master Biomedische Wetenschappen Jabar Zada Freba."

Verwante presentaties


Ads door Google