Student: Jana Defever Stageplaats: UZ Gent (ARG) Stagebegeleidster: Cottyn A. Stagegever: Tilleman K. Stagementor: De Roo Chloë Laser capture microdissection.

Presentatie over: "Student: Jana Defever Stageplaats: UZ Gent (ARG) Stagebegeleidster: Cottyn A. Stagegever: Tilleman K. Stagementor: De Roo Chloë Laser capture microdissection."— Transcript van de presentatie:

1 Student: Jana Defever Stageplaats: UZ Gent (ARG) Stagebegeleidster: Cottyn A. Stagegever: Tilleman K. Stagementor: De Roo Chloë Laser capture microdissection (LCM) als methode om follikels te isoleren uit ovarieel weefsel waarbij de genexpressie in de granulosacellen en de eicel afzonderlijk geanalyseerd kan worden Bachelorproef

2 Overzicht o Situering o Doelstelling o Methodologie o Resultaten o LCM o Celcultuur o RT-qPCR o Conclusie o Toekomstperspectief

3 Situering o Behandelingen bij maligne/benigne aandoeningen  gonadotoxisch  inductie prematuur ovarieel falen o Mogelijkheid: cryopreservatie ovarieel weefsel  Doel: omzeilen negatieve effecten gonadotoxische behandelingen  Risico: reïmplanteren van maligne cellen o Oplossing: in vitro cultuur en maturatie primordiale follikels

4 Doelstelling LCM Genexpressie analyse

5 Methodologie Bewerking ovarieel weefsel Aanmaak membraanslide Isolatie follikels via LCM RNA-extractie RT-qPCR

6 Resultaten LCM: Optimalisatie PEN-slides Stalen ovarieel weefsel 5 µm versus 10 µm “Close&Cut and AutoLPC” functie “LPC” functie

7 Resultaten LCM: Optimalisatie scheiding granulosacellen en eicel “Close&Cut and AutoLPC” “LPC’ en “Close&Cut and AutoLPC”

8 Resultaten Celcultuur: nagaan beïnvloeding gedeparaffiniseerde weefselcoupes o COV 434 human ovarian granulosa cell tumor Schieten van opeenvolgend aantal cellen: 10 50 100 500

9 Resultaten RT-qPCR o Fast modality protocol: o SYBR ® Green Dye o Primer mastermix GAPDH Staal∆ Ct (n=3) COV 434 paraffine 1030,129 COV 434 paraffine 50 25,086 COV 434 paraffine 100 22,841 COV 434 paraffine 500 20,586

10 Conclusie Minimum 10 cellen ≈ 1 follikel Optimaal 50 cellen ≈ 5 follikels

11 Toekomstperspectief Mogelijkheid tot uitvoering genexpressie analyse Ontrafeling en studie primordiaal follikelstadium Optimale cultuurcondities In vitro cultuur van primordiale follikels

12 Student: Jana Defever Stageplaats: UZ Gent (ARG) Stagebegeleidster: Cottyn A. Stagegever: Tilleman K. Stagementor: De Roo Chloë Laser capture microdissection (LCM) als methode om follikels te isoleren uit ovarieel weefsel waarbij de genexpressie in de granulosacellen en de eicel afzonderlijk geanalyseerd kan worden Bachelorproef