De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

De presentatie wordt gedownload. Even geduld aub

BEPALING VAN ETHANOL IN BIOLOGISCHE MONSTERS MET BEHULP VAN STATISCHE HEADSPACE EN GASCHROMATOGRAFIE MET VLAMIONISATIE DETECTOR Jan De Rycke.

Verwante presentaties


Presentatie over: "BEPALING VAN ETHANOL IN BIOLOGISCHE MONSTERS MET BEHULP VAN STATISCHE HEADSPACE EN GASCHROMATOGRAFIE MET VLAMIONISATIE DETECTOR Jan De Rycke."— Transcript van de presentatie:

1 BEPALING VAN ETHANOL IN BIOLOGISCHE MONSTERS MET BEHULP VAN STATISCHE HEADSPACE EN GASCHROMATOGRAFIE MET VLAMIONISATIE DETECTOR Jan De Rycke

2 Overzicht Ethanol Statische headspace Optimalisatie Validatie Systeemgeschiktheid Methode Conclusie

3 Ethanol Legale drug Hersenen zijn het doelwitorgaan Beperkt motorische handelingen en coördinatie

4 Biotransformatie ethanol 5 à 10% onveranderd geëlimineerd via de longen, huid, urine, adem en zweet 90 à 95% wordt via biotransformatie afgebroken tot H 2 O en CO 2

5 Statische Headspace aanwezigheid en concentratiebepaling vluchtige, organische componenten Analyse van verschillende matrices met minimale staalvoorbereiding

6 Statische Headspace Headspace vial Gas fase (vluchtige componenten) Staal fase (niet-vluchtige componenten) Crimp cap met septum

7 Gaschromatograaf-FID Kolom: Rtx®-BAC Plus 1 Temperatuur FID: 250 °C Druk: 8 psi Temperatuur injector: 140 °C Split ratio: 10 Run time: 10,5 min Temperatuur (°C) Temperatuurgradiënt (°C/min) Tijd op eenzelfde temperatuur (min) Totaal (min)

8 Voorbeeld chromatogram

9 Optimalisatie Platentemperatuur Incubatietijd Uitzouten Het effect van uitzouten Welk zout is het meest geschikt? Volume

10 Platentemperatuur

11 Incubatietijd Incubatietijd (min)Area ethanolArea acetaldehydeProcentueel gehalte acetaldehyde ,29% ,38% ,16% ,03%

12 Uitzouten zonder zoutArea ethanolArea acetaldehydeProcentueel gehalte acetaldehyde ,23% ,10% ,64% met zoutArea ethanolArea acetaldehydeProcentueel gehalte acetaldehyde ,26% ,29% ,09%

13 Aard van het zout Zout Area ethanol Area acetaldehyde Procentueel gehalte acetaldehyde K 2 CO ,01% Na 2 SO ,58% MgSO ,54% (NH 4 ) 2 SO ,75% blanco ,79%

14 Aard van het zout ZoutArea ethanolArea acetaldehyde Procentueel gehalte acetaldehyde K 2 CO 3 (1) ,24% K 2 CO 3 (2) ,23% K 2 CO 3 (3) ,07% (NH 4 ) 2 SO 4 (1) ,33% (NH 4 ) 2 SO 4 (2) ,76% (NH 4 ) 2 SO 4 (3) ,95%

15 Volume Toegevoegd volume (ml) Area ethanol Area acetaldehyde Procentueel gehalte acetaldehyde 1, ,04% 1, ,31% 2, ,52% 2, ,71% 3, ,80% 3, ,06% 4, ,14%

16 Optimalisatie Platentemperatuur: 50°C Incubatietijd: 15 minuten Uitzouten: 1M (NH 4 ) 2 SO 4 Volume: 1 mL zoutoplossing µL staal Interne standaard: t-butanol

17 Methode validatie Kalibratiemodel R² > 0,9995

18 Kalibratiemodel controles BIAS en precisie Controle (g/L)Ondergrens (g/L)Bovengrens (g/L) Resultaat (g/L) 0,20,170,23 0, ,971,03 1, ,913,093,0199 Concentratie (g/L) RUN 1 Resultaat (g/L) RUN 2 Resultaat (g/L) RUN3 Resultaat (g/L) RUN 4 Resultaat (g/L) RUN 5 Resultaat (g/L) Laag0,8 0,71770,80680,73080,69390,7675 0,75370,79130,75200,74080,7779 0,74730,78880,74250,75450,7564 Medium1,1 1,02611,08781,07371,06581,0683 1,05311,10221,03601,05661,0502 1,04591,08961,06731,06101,0474 Hoog3 2,97422,94272,96342,98563,0859 2,93462,98472,99942,99243,0226 2,93523,03443,04403,02092,9405

19 BIAS Within-run precisie Between-run precisie Concentratie (g/L) BIAS 0,8-5,65 % 1,1-3,45 % 3,0-0,31 % Concentratie (g/L)RUN 1RUN 2RUN 3RUN 4RUN 5 0,82,12%1,00%1,17%3,56%1,14% 1,11,10%0,59%1,56%0,35%0,88% 3,00,63%1,25%1,10%0,51%1,97% Concentratie (g/L) Between-run precisie 0,83,74% 1,11,87% 3,01,44%

20 Detectielimiet

21 Afwijking < 30% en relatieve standaard deviatie < 10% Concentratie (g/L)Resultaat (g/L) 0,20,1863 0,10,0928 0,050,0480 0,0250,0244 0,01250,0118 0,0050,0054 Resultaat (g/L)AfwijkingGemiddelde (g/L)Standaarddeviatie Relatieve standaarddeviatie 0,059018,0% 0,061080,001442,35% 0,060621,2% 0,061222,4% 0,061723,4% 0,062925,8%

22 Carry-over 6 g/L ethanol Carry-over < 10% laagste kalibrator (0,5 g/L) Concentratie (g/L) Area ethanol Area ethanol in blanco % ethanol in blanco Area ethanol 0,05 g/L (cut-off) ,17%9142

23 Evaluatie van de systeemgeschiktheid Precisie van de injectie Evaluatie van retentietijden van standaarden Kolomoventemperatuur Stabiliteit autosampler

24 Precisie van de injectie 6 maal interne standaard injecteren Relatieve standaarddeviatie < 15% Area T-butanol Injectie 1Injectie 2Injectie 3Injectie 4Injectie 5Injectie GemiddeldeStandaarddeviatieRelatieve standaarddeviatie ,8%

25 Evaluatie van retentietijden van standaarden Relatieve retentietijden Component Injectie 1Injectie 2Injectie 3Injectie 4Injectie 5Injectie 6 Methanol 0,535 0,5360,535 Acetaldehyde 0,566 0,565 Ethanol 0,683 0,682 0,683 Isopropanol 0,8390,8400,839 0,840 Aceton 0,914 0,9130,914 T-butanol 1,000 ComponentGemiddeldeStandaarddeviatie Relatieve standaarddeviatie Methanol0,5350,00040,08% Acetaldehyde0,5660,00040,07% Ethanol0,6830,00050,08% Isopropanol0,8400,00050,07% Aceton0,9140,00040,04% T-butanol1,0000,00000,00%

26 Kolomoventemperatuur 3 reeksen Gemiddelde berekenen Afwijking werkelijke waarde ten opzichte van theoretische waarde < 5% Tijd (min) Theoretische waarde (°C) Reeks 1 (°C) Reeks 2 (°C) Reeks 3 (°C) Gemiddelde waarde (°C) Afwijking (%) 0,04038,939,0 -2,33

27 Stabiliteit autosampler 14 identieke positieve bloedstalen Per twee met vier blanco stalen tussen de bloedstalen Maximaal toegelaten verschil is 8% PositieResultaat (g/L)% verschil 21,5076 7% Eerste en laatste meting 31,60871% 81,6251 0% Hoogste en laagste meting 91,61308% 141,6130 0% 151, ,5982 2% 211, ,5755 0% 271, ,5529 1% 331, ,5513 2% 391,5192

28 Conclusie ParameterVooropgestelde eisResultaat Precisie van de injectie Relatieve standaarddeviatie ≤15% 2,8% Evaluatie van de relatieve retentietijden Relatieve standaarddeviatie ≤0,5% 0,08% Kolomoventemperatuur Afwijking ≤ +/- 5%-2,42% Stabiliteit van de autosampler Verschil tussen 2 stalen ≤ 8%8% Kalibratie model 0 g/L – 3g/L0 g/L – 3 g/L lineair model Bias ≤ +/- 10%-5,65% Within-run precisie ≤ +/- 10%3,56% Between-run precisie ≤ +/- 10%3,74% Detectielimiet 0,05 g/L < 0,05 g/L Carry-over ≤ 10% signaal laagste kalibrator =

29 BEPALING VAN ETHANOL IN BIOLOGISCHE MONSTERS MET BEHULP VAN STATISCHE HEADSPACE EN GASCHROMATOGRAFIE MET VLAMIONISATIE DETECTOR Jan De Rycke


Download ppt "BEPALING VAN ETHANOL IN BIOLOGISCHE MONSTERS MET BEHULP VAN STATISCHE HEADSPACE EN GASCHROMATOGRAFIE MET VLAMIONISATIE DETECTOR Jan De Rycke."

Verwante presentaties


Ads door Google